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cly2810

金虫 (正式写手)

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[求助] 菜鸟求助：PCR扩增和扩增产物的克隆？？

书上如是说：在许多研究中,需要将PCR产物克隆,以获得目的DNA片段。

我不明白的地方是，要获得目的DNA片段就是通过PCR。PCR的产物就是DNA片段，要将产物克隆就是要获得更多的片段，继续PCR不就行了么？？

我理解的是PCR的产物中只有两条模板链是长的，其他的都是短的对吗？可以P出与模板链一样长的链吗？？

菜鸟问题，大虾见笑

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1楼 2013-07-02 16:55:37

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木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-07-09 13:06:15
cly2810: 金币+1, ★有帮助 2013-07-09 16:42:51

"我理解的是PCR的产物中只有两条模板链是长的，其他的都是短的对吗？可以P出与模板链一样长的链吗？？"

除了模板还是原来那么长（排除在反应中被降解的理想情况下），还会以线性增长扩增一头是引物，一头是一直延伸超过目的片段长度的，如果延伸温度足够长，会一直延伸到比较复杂的结构为止，然后是以指数增长扩增的两头是引物的目的产物，估计就是你说的短的产物。
一般的PCR用聚合酶不能进行超长片段扩增，不过，如果模板本身是PCR产物，再次PCR是有可能扩增到模板那么长的，按理论说是完全有可能，但实际试验操作时，还是要进行摸索，主要是PCR产物非特异性扩增的条带以及其他原因抑制扩增，通常需要做不同稀释倍数的摸索。