| 查看: 1603 | 回复: 9 | |||
[求助]
菜鸟求助：PCR扩增和扩增产物的克隆？？
|
|
书上如是说：在许多研究中,需要将PCR产物克隆,以获得目的DNA片段。 我不明白的地方是，要获得目的DNA片段就是通过PCR。PCR的产物就是DNA片段，要将产物克隆就是要获得更多的片段，继续PCR不就行了么？？ 我理解的是PCR的产物中只有两条模板链是长的，其他的都是短的对吗？可以P出与模板链一样长的链吗？？ 菜鸟问题，大虾见笑 |
回复此楼» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有268人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有3人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助师兄师姐~有关于巢式PCR的问题~~help
已经有11人回复
- PCR产物不做纯化和胶回收，直接TA克隆可以吗？
已经有13人回复
- 关于克隆技术——pcr产物测序问题
已经有16人回复
- 5kb大片段PCR扩增求助
已经有18人回复
- 求助：PCR扩增片段测序结果引物中间多出150bp的片段
已经有5人回复
- 荧光定量PCR扩增效率怎么做？？？？我要被逼疯了
已经有17人回复
- 求助！大片段4kb左右基因PCR克隆方法
已经有15人回复
- 天根公司的Long Taq DNA Polymerase的PCR扩增产物是平末端还是带A尾巴？
已经有8人回复
- pcr产物测序和克隆之后重组质粒测序结果一样吗？
已经有12人回复
- DGGE胶回收问题
已经有13人回复
- 真菌ITS序列PCR扩增 求助
已经有9人回复
- 【求助/交流】分子克隆后M13引物PCR扩增
已经有32人回复
- 【求助/交流】菌落PCR问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】为什么PCR扩增产物片段长度比设计时的要长很多？
已经有10人回复
- 【求助/交流】PCR产物连接请教！
已经有5人回复
- 【求助/交流】PCR阴性对照总有扩增产物 都有哪些可能？
已经有6人回复
- 【求助/交流】PCR 的原理是啥啊
已经有20人回复
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
2楼2013-07-03 00:28:19
3楼2013-07-03 02:02:01
4楼2013-07-04 13:54:51
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励新虫交流 2013-07-09 13:06:06
cly2810: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2013-07-09 16:42:41
kx444555: 金币+3, 鼓励新虫交流 2013-07-09 13:06:06
cly2810: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2013-07-09 16:42:41
|
关于你的这段话的2个问题： 1 PCR就是对目的DNA的富集过程。如果只想做多态性研究就不必做克隆，但以下情况需要你做克隆：a:要测序的目的片段较短，需要连到载体克隆后测序；b:认为目的基因内存在杂合位点，碱基的缺失和突变等情况；c:下一步试验的需要，比如需要对目的基因进行功能研究 ; 2 既然PCR是目的DNA富集的过程，经过30轮左右的指数定增过程，最终PCR产物中都是您的目的DNA大小的DNA片段。 |
5楼2013-07-08 16:24:52
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-07-09 13:06:15
cly2810: 金币+1, ★有帮助 2013-07-09 16:42:51
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-07-09 13:06:15
cly2810: 金币+1, ★有帮助 2013-07-09 16:42:51
|
"我理解的是PCR的产物中只有两条模板链是长的，其他的都是短的对吗？可以P出与模板链一样长的链吗？？" 除了模板还是原来那么长（排除在反应中被降解的理想情况下），还会以线性增长扩增一头是引物，一头是一直延伸超过目的片段长度的，如果延伸温度足够长，会一直延伸到比较复杂的结构为止，然后是以指数增长扩增的两头是引物的目的产物，估计就是你说的短的产物。 一般的PCR用聚合酶不能进行超长片段扩增，不过，如果模板本身是PCR产物，再次PCR是有可能扩增到模板那么长的，按理论说是完全有可能，但实际试验操作时，还是要进行摸索，主要是PCR产物非特异性扩增的条带以及其他原因抑制扩增，通常需要做不同稀释倍数的摸索。 |
6楼2013-07-09 08:05:23
7楼2013-10-10 16:09:26
8楼2013-10-10 16:10:05
9楼2013-10-10 16:10:43
10楼2013-10-11 18:45:47
50