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cly2810

金虫 (正式写手)

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[求助] 菜鸟求助：PCR扩增和扩增产物的克隆？？

书上如是说：在许多研究中,需要将PCR产物克隆,以获得目的DNA片段。

我不明白的地方是，要获得目的DNA片段就是通过PCR。PCR的产物就是DNA片段，要将产物克隆就是要获得更多的片段，继续PCR不就行了么？？

我理解的是PCR的产物中只有两条模板链是长的，其他的都是短的对吗？可以P出与模板链一样长的链吗？？

菜鸟问题，大虾见笑

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1楼 2013-07-02 16:55:37

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木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

引用回帖:

9楼: Originally posted by cly2810 at 2013-10-10 16:10:43
可不可以这样理解：PCR扩增并不能确保特异性，而经过酶切、连接到载体、克隆等步骤则可以保证目的片段的特异性扩增以及表达？
PCR是一个富集过程，而克隆等则有筛选的作用？...

影响PCR的因素很多，而且扩增的过程有可能会发生突变，而克隆得到的质粒，在大肠杆菌内扩增保真率比PCR更高，质粒复制再提取质粒获得完全相同的片段要比直接PCR来得容易也更有保证。而且PCR会有一定的非特异带非目的带扩增出来，如果得到的片段需要进行克隆进行表达或其他功能研究，就需要在克隆后鉴定是否目的带。
如果只是检测是否有预期的片段，直接PCR就可以了，更常见的是实时定量PCR检测，不用再进行克隆也能达到某些目的，比如mRNA的转录水平等。