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三国恋

银虫 (小有名气)

[求助] PCR批出非目标带，空白对照都有，重复进行，有时有，有时没有，咋回事？

图中 10,11,12泳道为不同模版同种引物P的结果，14为水为模板的空白对照，2000M为DL 2000marker,目标带在224bp左右，最上面的条带是什么啊，怎么连水都能做出来啊。哪位大神能给帮助下啊。
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1楼2012-08-26 10:23:35
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wittyjc

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2012-08-26 20:41:09
三国恋: 金币+3, ★有帮助 2012-08-28 10:40:37
10道是蛋白杂质？不确定。
1500到2000的条带可能是体系的污染，连空白对照中也有。也有可能是这对引物就是能p出两个条带，然后空白道有可能是你点样的时候把12道的样品流到13道空白道中，也有可能是体系污染。我一般会把空白和样品点在MARK两边。
愚见。
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2楼2012-08-26 11:13:39
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-08-26 20:41:16
楼主的引物是扩增的什么基因，如果是细菌或病毒也是有可能的，水里也会有。首先要看你的引物设计的是否真的特异。
然后，楼主把你的PCR水换一下看，你的水是自己灭菌的嘛还是买的，如果是自己灭菌的，就在用买的水做个对照看。
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3楼2012-08-26 19:28:56
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-27 13:44:07
三国恋: 金币+2, ★有帮助 2012-08-28 10:40:30
1：10泳道感觉是有蛋白污染，楼主的模板是基因组麽？
2:  其次每个泳道都在1500bp左右出现条带，可能原因有两个，首先，体系里面有污染，酶，引物，跟水，都换一遍，其次设计的引物的特异性高不高？
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
4楼2012-08-27 08:38:22
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wu_shiyong

银虫 (正式写手)
实验操作问题
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低调稳重务实内敛---------------残
5楼2012-08-27 12:21:14
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三国恋

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Marado at 2012-08-27 08:38:22
1：10泳道感觉是有蛋白污染，楼主的模板是基因组麽？
2:  其次每个泳道都在1500bp左右出现条带，可能原因有两个，首先，体系里面有污染，酶，引物，跟水，都换一遍，其次设计的引物的特异性高不高？

我是做的动物线粒体DNA PCR，模板是提取的线粒体DNA，应该还有大量的基因组DNA，曾经也做出过空白有条带，也是这么大小，换了引物，水，结果就没了，现在又出现了，不知道咋回事，这个实验同时还有一起做其他的引物的，试剂共用，其他的引物空白就没有，就这个有。
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6楼2012-08-28 10:34:44
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三国恋

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-26 19:28:56
楼主的引物是扩增的什么基因，如果是细菌或病毒也是有可能的，水里也会有。首先要看你的引物设计的是否真的特异。
然后，楼主把你的PCR水换一下看，你的水是自己灭菌的嘛还是买的，如果是自己灭菌的，就在用买的水 ...

模板是动物线粒体ＤＮＡ，应该还有大量的基因组ＤＮＡ，灭菌水一直用着自己灭菌的，做其他引物的实验挺好的，没有杂带，就这个引物有，换了新的该引物，有时有。
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7楼2012-08-28 10:37:18
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三国恋

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wittyjc at 2012-08-26 11:13:39
10道是蛋白杂质？不确定。
1500到2000的条带可能是体系的污染，连空白对照中也有。也有可能是这对引物就是能p出两个条带，然后空白道有可能是你点样的时候把12道的样品流到13道空白道中，也有可能是体系污染。我一 ...

１０号应该是蛋白质污染，如果１３号是12号溢出的污染，那么250bp下方的那个带怎么会没有，不过点marker两边的建议不错，谢谢。
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8楼2012-08-28 10:39:53
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lecou

新虫 (初入文坛)
同学之前出现过类似情况是因为，引物污染了，你可以换一下引物试试，平时引物可以多分装几管~
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希望自己能平常心面对实验中的种种
9楼2012-08-28 10:44:16
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