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三国恋

银虫 (小有名气)

[求助] PCR批出非目标带,空白对照都有,重复进行,有时有,有时没有,咋回事?

图中 10,11,12泳道为不同模版同种引物P的结果,14为水为模板的空白对照,2000M为DL 2000marker,目标带在224bp左右,最上面的条带是什么啊,怎么连水都能做出来啊。哪位大神能给帮助下啊。
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wittyjc

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2012-08-26 20:41:09
三国恋: 金币+3, 有帮助 2012-08-28 10:40:37
10道是蛋白杂质?不确定。
1500到2000的条带可能是体系的污染,连空白对照中也有。也有可能是这对引物就是能p出两个条带,然后空白道有可能是你点样的时候把12道的样品流到13道空白道中,也有可能是体系污染。我一般会把空白和样品点在MARK两边。
愚见。
2楼2012-08-26 11:13:39
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-08-26 20:41:16
楼主的引物是扩增的什么基因,如果是细菌或病毒也是有可能的,水里也会有。首先要看你的引物设计的是否真的特异。
然后,楼主把你的PCR水换一下看,你的水是自己灭菌的嘛还是买的,如果是自己灭菌的,就在用买的水做个对照看。
3楼2012-08-26 19:28:56
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-27 13:44:07
三国恋: 金币+2, 有帮助 2012-08-28 10:40:30
1:10泳道感觉是有蛋白污染,楼主的模板是基因组麽?
2:  其次每个泳道都在1500bp左右出现条带,可能原因有两个,首先,体系里面有污染,酶,引物,跟水,都换一遍,其次设计的引物的特异性高不高?
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
4楼2012-08-27 08:38:22
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wu_shiyong

银虫 (正式写手)

实验操作问题
低调稳重务实内敛---------------残
5楼2012-08-27 12:21:14
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三国恋

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Marado at 2012-08-27 08:38:22
1:10泳道感觉是有蛋白污染,楼主的模板是基因组麽?
2:  其次每个泳道都在1500bp左右出现条带,可能原因有两个,首先,体系里面有污染,酶,引物,跟水,都换一遍,其次设计的引物的特异性高不高?

我是做的动物线粒体DNA PCR,模板是提取的线粒体DNA,应该还有大量的基因组DNA,曾经也做出过空白有条带,也是这么大小,换了引物,水,结果就没了,现在又出现了,不知道咋回事,这个实验同时还有一起做其他的引物的,试剂共用,其他的引物空白就没有,就这个有。
6楼2012-08-28 10:34:44
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三国恋

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-26 19:28:56
楼主的引物是扩增的什么基因,如果是细菌或病毒也是有可能的,水里也会有。首先要看你的引物设计的是否真的特异。
然后,楼主把你的PCR水换一下看,你的水是自己灭菌的嘛还是买的,如果是自己灭菌的,就在用买的水 ...

模板是动物线粒体DNA,应该还有大量的基因组DNA,灭菌水一直用着自己灭菌的,做其他引物的实验挺好的,没有杂带,就这个引物有,换了新的该引物,有时有。
7楼2012-08-28 10:37:18
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三国恋

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wittyjc at 2012-08-26 11:13:39
10道是蛋白杂质?不确定。
1500到2000的条带可能是体系的污染,连空白对照中也有。也有可能是这对引物就是能p出两个条带,然后空白道有可能是你点样的时候把12道的样品流到13道空白道中,也有可能是体系污染。我一 ...

10号应该是蛋白质污染,如果13号是12号溢出的污染,那么250bp下方的那个带怎么会没有,不过点marker两边的建议不错,谢谢。
8楼2012-08-28 10:39:53
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lecou

新虫 (初入文坛)

同学之前出现过类似情况是因为,引物污染了,你可以换一下引物试试,平时引物可以多分装几管~
希望自己能平常心面对实验中的种种
9楼2012-08-28 10:44:16
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