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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR空白对照组阳性
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waldenpond

金虫 (著名写手)

[求助] PCR空白对照组阳性

最近做PCR，结果电泳后空白对照组（无DNA模板，加的是ddh20）总是阳性。操作应该没有问题啊。枪头随时换，ddh2o也是刚消过毒的，即使里面有DNA，电泳后的浓度也不应该这么大啊（空白组的条带和其他条带差不多亮）。
大虫们看一下是怎么回事啊。
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1楼 2012-05-31 10:36:38
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caoluoyuan

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
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小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-31 13:46:44
waldenpond: 金币+5 2012-06-03 15:57:32
肯定是污染了，ddH2o2建议先用DNA酶处理一下再高压，还有可能是dNTP混合液污染了，建议换新的试试。祝你好运。
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2楼2012-05-31 11:48:07
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普通回帖

hongqifei

木虫 (小有名气)
PCR循环数多少呢？
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何须剑道争锋？千人指，万人封，可问江湖鼎峰，三尺秋水尘不染，天下无双。
3楼2012-05-31 15:10:16
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cxb-abc

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
waldenpond: 金币+3 2012-06-03 15:57:42
建议污染严重的PCR，在超净台上进行，再做PCR试一试？用可灭菌的枪头来操作。
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4楼2012-05-31 15:54:33
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zqx128

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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waldenpond: 金币+2, ★有帮助 2012-07-16 14:07:04
可能不是水的问题吧，有模板污染其他成分，建议把所有的东西都换新的，也不是太贵的东西。
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5楼2012-05-31 16:44:24
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
waldenpond: 金币+3, ★有帮助 2012-06-03 15:57:53
更换所有试剂，另外有可能你的移液器也被污染了，最好用带滤芯的枪头，可以避免这个问题。
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
6楼2012-05-31 23:37:25
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draco1987

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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waldenpond: 金币+2, ★有帮助 2012-06-03 15:57:07
我觉得移液枪污染造成阳性的可能性不太大，正常使用的话液体一般是不会接触到移液枪本身的，就算曾经污染过，也不大可能次次都能接触到枪体。多半是PCR体系液里某样试剂污染了，建议还是把试剂全换了吧。为防万一，移液枪用酒精擦一下吧，或者换一把用着试试。
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7楼2012-06-01 09:43:11
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heroyl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
waldenpond: 金币+1, ★有帮助 2012-06-03 15:58:02
可以一个一个换，一个一个排除
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实验虐我千百遍，我待实验如初恋
8楼2012-06-01 11:38:23
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

【答案】应助回帖

★
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waldenpond: 金币+1, ★有帮助 2012-06-03 15:58:08
还是用DNA酶处理一下再高压，可能会好点。
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蓝精灵
9楼2012-06-01 12:29:33
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果汁妈

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
waldenpond: 金币+1 2012-06-03 15:58:26
有可能是移液器的问题。我有一段时间也是老是污染。我把枪都拆了，用酒精擦了，停了一段时间之后就好
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10楼2012-06-01 13:02:53
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