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waldenpond

金虫 (著名写手)

[求助] PCR空白对照组阳性

最近做PCR,结果电泳后空白对照组(无DNA模板,加的是ddh20)总是阳性。操作应该没有问题啊。枪头随时换,ddh2o也是刚消过毒的,即使里面有DNA,电泳后的浓度也不应该这么大啊(空白组的条带和其他条带差不多亮)。
大虫们看一下是怎么回事啊。
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caoluoyuan

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
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小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-31 13:46:44
waldenpond: 金币+5 2012-06-03 15:57:32
肯定是污染了,ddH2o2建议先用DNA酶处理一下再高压,还有可能是dNTP混合液污染了,建议换新的试试。祝你好运。
2楼2012-05-31 11:48:07
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普通回帖

hongqifei

木虫 (小有名气)

PCR循环数多少呢?
何须剑道争锋?千人指,万人封,可问江湖鼎峰,三尺秋水尘不染,天下无双。
3楼2012-05-31 15:10:16
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cxb-abc

银虫 (小有名气)

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★ ★ ★
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waldenpond: 金币+3 2012-06-03 15:57:42
建议污染严重的PCR,在超净台上进行,再做PCR试一试?用可灭菌的枪头来操作。
4楼2012-05-31 15:54:33
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zqx128

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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waldenpond: 金币+2, 有帮助 2012-07-16 14:07:04
可能不是水的问题吧,有模板污染其他成分,建议把所有的东西都换新的,也不是太贵的东西。
5楼2012-05-31 16:44:24
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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waldenpond: 金币+3, 有帮助 2012-06-03 15:57:53
更换所有试剂,另外有可能你的移液器也被污染了,最好用带滤芯的枪头,可以避免这个问题。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
6楼2012-05-31 23:37:25
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draco1987

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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waldenpond: 金币+2, 有帮助 2012-06-03 15:57:07
我觉得移液枪污染造成阳性的可能性不太大,正常使用的话液体一般是不会接触到移液枪本身的,就算曾经污染过,也不大可能次次都能接触到枪体。多半是PCR体系液里某样试剂污染了,建议还是把试剂全换了吧。为防万一,移液枪用酒精擦一下吧,或者换一把用着试试。
7楼2012-06-01 09:43:11
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heroyl

木虫 (正式写手)

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waldenpond: 金币+1, 有帮助 2012-06-03 15:58:02
可以一个一个换,一个一个排除
实验虐我千百遍,我待实验如初恋
8楼2012-06-01 11:38:23
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

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waldenpond: 金币+1, 有帮助 2012-06-03 15:58:08
还是用DNA酶处理一下再高压,可能会好点。
蓝精灵
9楼2012-06-01 12:29:33
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果汁妈

铁虫 (小有名气)

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waldenpond: 金币+1 2012-06-03 15:58:26
有可能是移液器的问题。我有一段时间也是老是污染。我把枪都拆了,用酒精擦了,停了一段时间之后就好
10楼2012-06-01 13:02:53
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