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[交流]
SYBR 荧光定量PCR 阴性对照问题
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反应条件： 98℃ 2min 40循环 98℃ 30s 53.6℃ 30s 72℃ 30s 72℃ 7min 反应体系： MightAmp mix （takara ） 10μL 引物（2μM） 1μL 引物（2μM） 1μL 模板 2μL 水 6μL 20μL体系 问题： 1.前辈们看看 我这个图，无模板对照和阴性对照都出现扩增是不是不行啊？怎么去除呢？引物浓度调节我试过了，降低引物浓度是，阴性对照也会随之消失，但是却应先检出限。 将循环数减少至30个循环，阴性扩增会消失，但是不知道可不可性，同时还是影响检出限。 我在考虑增大退火温度是否可行呢？ 求大家指点。郁闷啊 ~~~ 小弟刚入手。 图标说明结果说明： 孔 荧光基团 样本类型 Cq 解链温度 1 A01-Ch5 SYBR 阳性对照 13.04 80.19 A02-Ch5 SYBR 阳性对照 13.17 80.13 A03-Ch5 SYBR 阳性对照 12.92 79.97 A04-Ch5 SYBR 阳性对照 17.81 80 C03-Ch5 SYBR 阳性对照 18.05 80.01 C01-Ch5 SYBR 无模板对照 32.32 80.17 C02-Ch5 SYBR 无模板对照 32.37 80.04 C05-Ch5 SYBR 阴性对照 32.68 79.93 C06-Ch5 SYBR 阴性对照 33.09 79.86  1.png  2.png |
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气溶胶污染，之前我也遇见过，注意加试剂和加模板移液枪分开，两个房间加样，用过的垃圾缸及时清理，加样顺序，先试剂，后阴性对照，先样品，加完后盖上盖子在加阳性模板，具体情况，具体对待。我一般40个循环，阴性对照没有值 发自小木虫Android客户端 |
8楼2016-01-25 05:53:05