应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » SYBR 荧光定量PCR 阴性对照问题
81/1返回列表
查看: 3447  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

冯可

新虫 (初入文坛)

[交流] SYBR 荧光定量PCR 阴性对照问题

反应条件：
98℃ 2min
40循环
98℃ 30s
53.6℃ 30s
72℃ 30s
72℃  7min
反应体系：
MightAmp mix （takara ） 10μL
引物（2μM）             1μL
引物（2μM）             1μL
模板                     2μL
水                       6μL
                                          20μL体系
问题：
1.前辈们看看 我这个图，无模板对照和阴性对照都出现扩增是不是不行啊？怎么去除呢？引物浓度调节我试过了，降低引物浓度是，阴性对照也会随之消失，但是却应先检出限。 将循环数减少至30个循环，阴性扩增会消失，但是不知道可不可性，同时还是影响检出限。 我在考虑增大退火温度是否可行呢？
求大家指点。郁闷啊 ~~~ 小弟刚入手。

图标说明结果说明：
孔        荧光基团        样本类型                   Cq        解链温度 1
A01-Ch5        SYBR        阳性对照          13.04        80.19
A02-Ch5        SYBR        阳性对照           13.17        80.13
A03-Ch5        SYBR        阳性对照           12.92        79.97
A04-Ch5        SYBR        阳性对照                 17.81        80
C03-Ch5        SYBR        阳性对照                 18.05        80.01
C01-Ch5        SYBR        无模板对照        32.32        80.17
C02-Ch5        SYBR        无模板对照        32.37        80.04
C05-Ch5        SYBR        阴性对照                 32.68        79.93
C06-Ch5        SYBR        阴性对照                  33.09        79.86
SYBR 荧光定量PCR 阴性对照问题
1.png


SYBR 荧光定量PCR 阴性对照问题-1
2.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-09-12 21:05:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

86964109

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-09-13 17:14:19
你这个是不是存在气溶胶污染啊
赞一下 回复此楼
2楼2013-09-13 08:16:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shwjs88

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
以前碰到过，跑到别的楼上借了点水，高压后再用，解决了。就是污染

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
3楼2013-09-14 13:34:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxfans

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不用担心 我用的引物一直都有这样的问题。理论上说ct在33以上算是超出检测灵敏度范围的不可信数据。而且我每次ntc都有这样的现象，很难做到不出扩增的阴性对照。有说法是在加模板时换到另外一个房间（有条件的可以单批出一个房间做定量），但我没试过
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2013-09-15 10:26:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sfj311

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我做的也是这样，阴性很不稳定，至今还没找到答案
赞一下 回复此楼
5楼2014-09-15 10:56:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吕木木

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
怎么做阴性对照啊，急死了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2016-01-25 01:27:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吕木木

新虫 (小有名气)
错了，是怎么做阳性对照啊

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2016-01-25 01:27:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kx361

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
气溶胶污染，之前我也遇见过，注意加试剂和加模板移液枪分开，两个房间加样，用过的垃圾缸及时清理，加样顺序，先试剂，后阴性对照，先样品，加完后盖上盖子在加阳性模板，具体情况，具体对待。我一般40个循环，阴性对照没有值

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2016-01-25 05:53:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 冯可 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:42 by ZvyPK8n6Nfki
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:34 by ZvyPK8n6Nfki
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:28 by ZvyPK8n6Nfki
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:18 by ZvyPK8n6Nfki
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:46 by b8fCuTHqckEt
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 4/200 2026-09-28 23:19 by b8fCuTHqckEt
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:12 by b8fCuTHqckEt
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 5/250 2026-09-28 22:45 by ez6fGg9abYaj
[有机交流] 同一个分子，一条来自文献，一条来自AI——不告诉你答案，你会选哪条？ +3 tianxiaoxian 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:44 by tianxiaoxian
[找工作] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 5/250 2026-09-28 22:32 by ez6fGg9abYaj
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:28 by ez6fGg9abYaj
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 3/150 2026-09-28 22:21 by ez6fGg9abYaj
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:15 by ez6fGg9abYaj
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 3/150 2026-09-28 19:08 by 9lS3ad5oOymn
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 18:51 by 9lS3ad5oOymn
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 17:30 by ZYXdhzDAy9ZX
[教师之家] 某top大学教授说“能够在市场中兑现的能力才是真能力”无比同意！ +7 zju2000 2026-09-26 8/400 2026-09-28 16:42 by beefly
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-28 15:32 by ZYXdhzDAy9ZX
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭