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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请大神帮我看看我的实时定量PCR结果 分析一下失败的原因 有图有真相
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yumeng_6964

金虫 (小有名气)

[交流] 请大神帮我看看我的实时定量PCR结果 分析一下失败的原因 有图有真相

有图有真相吖
帮忙分析一下 谢谢
所用试剂和仪器回复在二楼
请大神帮我看看我的实时定量PCR结果 分析一下失败的原因 有图有真相
Amplification Plot2.jpg


请大神帮我看看我的实时定量PCR结果 分析一下失败的原因 有图有真相-1
Melt Curve.jpg


请大神帮我看看我的实时定量PCR结果 分析一下失败的原因 有图有真相-2
Multicomponent Plot.jpg


请大神帮我看看我的实时定量PCR结果 分析一下失败的原因 有图有真相-3
Raw Data Plot.jpg


请大神帮我看看我的实时定量PCR结果 分析一下失败的原因 有图有真相-4
RQ vs Sample.jpg


请大神帮我看看我的实时定量PCR结果 分析一下失败的原因 有图有真相-5
w169h1317780_1378109714_236.jpg


请大神帮我看看我的实时定量PCR结果 分析一下失败的原因 有图有真相-6
w239h1317780_1378109712_597.jpg

[ Last edited by yumeng_6964 on 2013-9-3 at 10:44 ]
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1楼 2013-09-03 10:43:30
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yumeng_6964

金虫 (小有名气)
反应试剂是Takara SYBR Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus)；
反应条件按照说明书来95度30s,40循环(95度3s+60度30s),溶解曲线是：95度15s+60度1min+95度15s；
反应仪器是AB 7500 fast.

操作都很小心，冰上进行。每一步都离心，没有气泡。

谢谢啦！！！
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2楼2013-09-03 10:44:19
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beautybanana

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-09-04 16:34:27
yumeng_6964: 金币+3 2013-09-05 15:53:35
你在PCR仪器上打开你扩增结果的软件,把图调出来,调整下纵坐标的范围到合适的值(溶解曲线应该就正常了),扩增曲线你把自动的改为手动的看看,后面的图形应该就不弯曲了.试试
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3楼2013-09-04 16:25:40
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跳舞的骆驼

金虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
yumeng_6964: 金币+2, 我这次是没加Rox的 而且加液过程稍微有点问题 我已经加了延伸的步骤 试了一下第二次做效果就很好啦~ 2013-09-05 15:54:27
好厉害，怎么能做成这样子呢。
扩增曲线 是不是设置的问题，你有没有加rox，没加就设置none。
40循环(95度3s+60度30s),这点加一步72度延伸。
你确定你的模板普通PCR没有问题。
赞一下 回复此楼
4楼2013-09-05 13:22:15
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