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wangxw310

新虫 (初入文坛)


[交流] PCR扩增曲线往下趴的厉害,求原因,谢谢

最近做一病毒荧光定量PCR扩增曲线,曲线总是往下趴,到CT28左右就没有了,求各位大神给点建议!
PCR扩增曲线往下趴的厉害,求原因,谢谢
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love_st

金虫 (著名写手)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
wangxw310(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-27 17:14:41
两个方面:
引物探针设计不理想
体系是否有问题,特别是你所用的酶,不知道你是RNA的还是DNA的,你试着换别的酶试试
2楼2013-08-27 16:59:10
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wangxw310

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
2楼: Originally posted by love_st at 2013-08-27 16:59:10
两个方面:
引物探针设计不理想
体系是否有问题,特别是你所用的酶,不知道你是RNA的还是DNA的,你试着换别的酶试试

换了好几个公司的酶,结果都是这样,我的是RNA经过了逆转录
3楼2013-08-27 17:03:30
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love_st

金虫 (著名写手)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
wangxw310: 金币+1 2013-08-28 13:25:25
引用回帖:
3楼: Originally posted by wangxw310 at 2013-08-27 17:03:30
换了好几个公司的酶,结果都是这样,我的是RNA经过了逆转录...

你如果是探针法的话,就围绕探针再多设计几对引物,肯定可以筛选出合适的引物,因为你的高浓度的模板扩增不错,说明探针效率可以
4楼2013-08-28 09:12:59
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漩涡鸣人

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我的也不行惨死了,想发个帖还么有金币。。。
5楼2014-01-06 21:02:55
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漩涡鸣人

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我的就到不了平台期,不知道仁兄怎么解决的
6楼2014-01-06 21:09:45
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vege的桌子

铜虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
走一下引物和探针的用量,还不行的话只能重新设计了,应该是探针的问题
7楼2014-01-08 14:02:15
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
模板量太少,基本上是本底水平,起来的信号还不一定是扩增产物
8楼2014-01-08 14:24:56
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