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PCR扩增曲线往下趴的厉害,求原因,谢谢
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wangxw310
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PCR扩增曲线往下趴的厉害,求原因,谢谢
最近做一病毒荧光定量PCR扩增曲线,曲线总是往下趴,到CT28左右就没有了,求各位大神给点建议!
SN7Y_$}6LHB)AV{)%D`B}@8.jpg
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2013-08-27 16:55:20
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wangxw310(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助!
2013-08-27 17:14:41
两个方面:
引物探针设计不理想
体系是否有问题,特别是你所用的酶,不知道你是RNA的还是DNA的,你试着换别的酶试试
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2013-08-27 16:59:10
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2楼
:
Originally posted by
love_st
at 2013-08-27 16:59:10
两个方面:
引物探针设计不理想
体系是否有问题,特别是你所用的酶,不知道你是RNA的还是DNA的,你试着换别的酶试试
换了好几个公司的酶,结果都是这样,我的是RNA经过了逆转录
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2013-08-27 17:03:30
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3楼
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wangxw310
at 2013-08-27 17:03:30
换了好几个公司的酶,结果都是这样,我的是RNA经过了逆转录...
你如果是探针法的话,就围绕探针再多设计几对引物,肯定可以筛选出合适的引物,因为你的高浓度的模板扩增不错,说明探针效率可以
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2013-08-28 09:12:59
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我的就到不了平台期,不知道仁兄怎么解决的
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走一下引物和探针的用量,还不行的话只能重新设计了,应该是探针的问题
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7楼
2014-01-08 14:02:15
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模板量太少,基本上是本底水平,起来的信号还不一定是扩增产物
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8楼
2014-01-08 14:24:56
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