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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量PCR扩增曲线不光滑
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yesucao

木虫 (正式写手)

[求助] 荧光定量PCR扩增曲线不光滑

小虫所使用的仪器是ABI7500，探针法，扩增出来的曲线老是曲曲折折的，不光滑，不知道其中的原因，该如何改进？见下图。
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1楼2012-08-17 22:13:16
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woshizhufeng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
探针发没做过，做的sybrgreen ,是引物的问题吧
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2楼2012-08-17 23:17:49
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surui1109

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yesucao: 金币+20, 1 2012-08-18 20:03:45
amisking: 金币-17, 楼主操作失误，扣回多余奖励 2012-08-18 21:53:57
是不是酶的问题，你用的酶是不是热启动酶？还有看看是不是模板问题，比如保存不当被降解了呢？
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3楼2012-08-18 12:17:00
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yesucao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by surui1109 at 2012-08-18 12:17:00
是不是酶的问题，你用的酶是不是热启动酶？还有看看是不是模板问题，比如保存不当被降解了呢？

酶不需要热启动；模板是上午提取的，用的试剂盒，提完了就直接去做的荧光定量。
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4楼2012-08-18 20:03:38
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anglemanfred

银虫 (正式写手)
这个一般在ntc中是这样，阳性对照不会。根据我的经验，这在ntc中应该属于正常，如果不在，就有问题了。
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5楼2012-09-07 19:54:10
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bloodwar

银虫 (小有名气)
你这个什么都没扩出来，前期PCR没问题的话就是探针设计的问题了
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6楼2012-11-06 04:46:24
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不离不弃1215

铜虫 (小有名气)
这是不是没有发生扩增哦，我用的是ABI 的stepone，跟你的差不多，你可以改log为leage，这样你就能看到是不是有对数期了
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7楼2013-07-08 10:10:36
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
楼主解决了么？我做染料也遇到这种情况了，头疼啊
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8楼2015-12-15 10:43:12
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望海思月

铜虫 (小有名气)
楼主你的问题解决了吗？能否告知是什么原因导致的扩增曲线不平滑呢？我最近实验也碰到了这个问题，不知道怎么解决呢
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9楼2018-05-17 15:51:35
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