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yesucao

木虫 (正式写手)

[求助] 荧光定量PCR扩增曲线不光滑

小虫所使用的仪器是ABI7500,探针法,扩增出来的曲线老是曲曲折折的,不光滑,不知道其中的原因,该如何改进?见下图。



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woshizhufeng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
探针发没做过,做的sybrgreen ,是引物的问题吧
2楼2012-08-17 23:17:49
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surui1109

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yesucao: 金币+20, 1 2012-08-18 20:03:45
amisking: 金币-17, 楼主操作失误,扣回多余奖励 2012-08-18 21:53:57
是不是酶的问题,你用的酶是不是热启动酶?还有看看是不是模板问题,比如保存不当被降解了呢?
3楼2012-08-18 12:17:00
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yesucao

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by surui1109 at 2012-08-18 12:17:00
是不是酶的问题,你用的酶是不是热启动酶?还有看看是不是模板问题,比如保存不当被降解了呢?

酶不需要热启动;模板是上午提取的,用的试剂盒,提完了就直接去做的荧光定量。
4楼2012-08-18 20:03:38
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anglemanfred

银虫 (正式写手)

这个一般在ntc中是这样,阳性对照不会。根据我的经验,这在ntc中应该属于正常,如果不在,就有问题了。
5楼2012-09-07 19:54:10
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bloodwar

银虫 (小有名气)

你这个什么都没扩出来,前期PCR没问题的话就是探针设计的问题了
6楼2012-11-06 04:46:24
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不离不弃1215

铜虫 (小有名气)

这是不是没有发生扩增哦,我用的是ABI 的stepone,跟你的差不多,你可以改log为leage,这样你就能看到是不是有对数期了
7楼2013-07-08 10:10:36
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

楼主解决了么?我做染料也遇到这种情况了,头疼啊
8楼2015-12-15 10:43:12
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望海思月

铜虫 (小有名气)

楼主你的问题解决了吗?能否告知是什么原因导致的扩增曲线不平滑呢?我最近实验也碰到了这个问题,不知道怎么解决呢
9楼2018-05-17 15:51:35
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