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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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cellliu

新虫 (小有名气)

[求助] qPCR的标准曲线成线性很差,扩增效率低,是什么原因

如题。最近在分析一个家族中三个基因的表达,试引物的时候发现溶解曲线只有一个峰,但是标准曲线成线性很差,计算出来的扩增效率不在90—110%之间。求大虾指点迷津。

内参溶解曲线.JPG



内参标准曲线.JPG



内参溶解曲线.JPG



基因1标准曲线.JPG
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cellliu

新虫 (小有名气)

怎么没人回复啊。。。

目的基因1的溶解曲线.JPG

2楼2013-01-19 20:27:14
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jatie

铁杆木虫 (正式写手)

不懂,帮顶
3楼2013-01-20 10:06:08
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引物的特异性很好,有可能是你的标准曲线没做好,比如稀释的不准,如果标准曲线没有问题的话,那你的引物不能用,扩增效率太差

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2013-01-20 12:05:06
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cellliu

新虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2013-01-20 12:05:06
引物的特异性很好,有可能是你的标准曲线没做好,比如稀释的不准,如果标准曲线没有问题的话,那你的引物不能用,扩增效率太差

谢谢。
5楼2013-01-25 19:25:48
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yeng

新虫 (初入文坛)

标曲可以3倍3倍的稀释,如果10倍10倍的稀释后几个点会太低,识别不了,可能导致虚假扩增
6楼2015-01-07 20:00:47
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大仙仙儿a

新虫 (小有名气)

稀释没有稀释开,不过建议换引物吧

发自小木虫IOS客户端
人之性恶,其善伪也
7楼2018-08-16 19:31:37
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