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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » qPCR的标准曲线成线性很差，扩增效率低，是什么原因
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cellliu

新虫 (小有名气)

[求助] qPCR的标准曲线成线性很差，扩增效率低，是什么原因

如题。最近在分析一个家族中三个基因的表达，试引物的时候发现溶解曲线只有一个峰，但是标准曲线成线性很差，计算出来的扩增效率不在90—110%之间。求大虾指点迷津。

内参溶解曲线.JPG



内参标准曲线.JPG



内参溶解曲线.JPG



基因1标准曲线.JPG
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1楼 2013-01-19 16:29:12
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cellliu

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2013-01-20 12:05:06
引物的特异性很好，有可能是你的标准曲线没做好，比如稀释的不准，如果标准曲线没有问题的话，那你的引物不能用，扩增效率太差

谢谢。
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5楼2013-01-25 19:25:48
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cellliu

新虫 (小有名气)
怎么没人回复啊。。。

目的基因1的溶解曲线.JPG
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2楼2013-01-19 20:27:14
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引物的特异性很好，有可能是你的标准曲线没做好，比如稀释的不准，如果标准曲线没有问题的话，那你的引物不能用，扩增效率太差
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cellliu
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2013-01-20 12:05:06
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yeng

新虫 (初入文坛)
标曲可以3倍3倍的稀释，如果10倍10倍的稀释后几个点会太低，识别不了，可能导致虚假扩增
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6楼2015-01-07 20:00:47
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