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请大神帮我看看我的实时定量PCR结果 分析一下失败的原因 有图有真相
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yumeng_6964
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虫号: 1317780
[交流]
请大神帮我看看我的实时定量PCR结果 分析一下失败的原因 有图有真相
有图有真相吖
帮忙分析一下 谢谢
所用试剂和仪器回复在二楼
Amplification Plot2.jpg
Melt Curve.jpg
Multicomponent Plot.jpg
Raw Data Plot.jpg
RQ vs Sample.jpg
w169h1317780_1378109714_236.jpg
w239h1317780_1378109712_597.jpg
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Last edited by yumeng_6964 on 2013-9-3 at 10:44
]
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2013-09-03 10:43:30
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yumeng_6964
金虫
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虫号: 1317780
反应试剂是Takara SYBR Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus);
反应条件按照说明书来95度30s,40循环(95度3s+60度30s),溶解曲线是:95度15s+60度1min+95度15s;
反应仪器是AB 7500 fast.
操作都很小心,冰上进行。每一步都离心,没有气泡。
谢谢啦!!!
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2楼
2013-09-03 10:44:19
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流
2013-09-04 16:34:27
yumeng_6964: 金币+3
2013-09-05 15:53:35
你在PCR仪器上打开你扩增结果的软件,把图调出来,调整下纵坐标的范围到合适的值(溶解曲线应该就正常了),扩增曲线你把自动的改为手动的看看,后面的图形应该就不弯曲了.试试
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3楼
2013-09-04 16:25:40
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金虫
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yumeng_6964: 金币+2, 我这次是没加Rox的 而且加液过程稍微有点问题 我已经加了延伸的步骤 试了一下第二次做效果就很好啦~
2013-09-05 15:54:27
好厉害,怎么能做成这样子呢。
扩增曲线 是不是设置的问题,你有没有加rox,没加就设置none。
40循环(95度3s+60度30s),这点加一步72度延伸。
你确定你的模板普通PCR没有问题。
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4楼
2013-09-05 13:22:15
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