应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 定量PCR的熔解曲线分析和PCRmix的选择
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
71/1返回列表
查看: 2291  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

xiao7270

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 定量PCR的熔解曲线分析和PCRmix的选择

各位定量PCR的虫侠们：
小虫第一次做定量PCR，关于熔解曲线的分析程序问题很大！我用的是ABI 7900HT仪器，做相对定量的时候，熔解曲线分析程序不能直接加在反应程序后面。程序跑完后，手动开始熔解曲线的分析，用的是仪器自带的默认程序，95度15s，60度15s，95度15s，40个循环。然而此时，问题出现了，仪器自动分析该程序跑完需要7.5小时，我等了3个循环，约用了50分钟。
请做过定量PCR 的虫侠们帮我分析一下，问题到底出在哪里？
--------------------------------我是第一和第二问题的分割线-----------------------------------
另外一个问题，有不带UDG酶的Fast Sybr Green Master Mix的产品么（无论哪家公司）？或者使用带有UDG酶的qPCRmix，而在反应开始之前不设置50度的UDG酶反应，应该不会对反应有太大影响吧？

[ Last edited by xiao7270 on 2012-7-4 at 13:30 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-07-04 08:42:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chlorella409

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xiao7270: 金币+2, 谢谢！不好意思写错了，是50度2min 2012-07-04 13:31:05
我们使用没有UDG的Mix,区别应该不会很大，但是我觉得你的UDG反应时间是不是设置错了，不可能要50分钟吧
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-04 11:19:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chlorella409

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xiao7270: 金币+2, 谢谢提供详细信息！看样子论坛里用7900的虫很少啊，呵呵 2012-07-05 11:02:29
Q1,使用含UDG的mix，2分钟UDG反应时间，加上40个循环30min,总的时间应该在一小时以内，我们使用7500 FAST大概在一小时二十分钟左右，因为7500自带溶解曲线设定，扩增完成后自动做溶解曲线，整个实验在两小时左右，所以我觉得你的7.5个小时是不是程序设置上有问题。Q2，UDG酶是用于PCR过程中扩增产物防污染的，根据个人需要随便选择而已
赞一下 回复此楼
3楼2012-07-04 13:47:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiao7270

至尊木虫 (著名写手)
lz弄清楚了，关于7900不能直接设置熔解曲线的事，问了ABI公司的技术支持，说，设置好程序后，保存，关闭该程序，再重新打开该程序，就可以添加熔解曲线分析了。另外，该分析是一个循环，即95度15s，60度15s，95度15s，升温过程缓慢，约20～30分钟。
第二个问题，有UDG酶和无UDG酶对反应本身影响不大，主要是看使用者是不是怕污染，怕的话就用50度2min保温一下，不用该过程也行。
赞一下 回复此楼
5楼2012-07-05 11:07:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chlorella409

木虫 (正式写手)
祝实验成功
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

xiao7270
6楼2012-07-05 11:22:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiao7270

至尊木虫 (著名写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by chlorella409 at 2012-07-05 11:22:44
祝实验成功

收到祝福很开心，
回复此楼
7楼2012-07-05 14:59:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
yingying15884楼
2012-07-04 17:22   回复  
xiao7270: 金币+1, 文坛精英也来蹭金币，满足一下该至尊吧 2012-07-05 11:03:07
祝福祝福
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiao7270 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料专硕322分 +10 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-04 10/500 2026-04-05 21:22 by 学员8dgXkO
[考研] 283求调剂 +5 baiiyu 2026-04-05 6/300 2026-04-05 20:35 by 啵啵啵0119
[考研] 329求调剂 +17 miaodesi 2026-04-02 20/1000 2026-04-05 18:33 by 蓝云思雨
[考研] 295求调剂 +8 FZAC123 2026-04-03 8/400 2026-04-05 17:46 by 蓝云思雨
[考研] 26考研调剂0710 0860 +9 补补不补 2026-04-03 14/700 2026-04-04 23:32 by 果冻大王
[考研] 266分，一志愿电气工程，本科材料，求材料专业调剂 +11 哇呼哼呼哼 2026-04-01 12/600 2026-04-04 23:17 by 永字号
[考研] 278求调剂 +3 依旧！ 2026-04-02 4/200 2026-04-04 20:27 by 蓝云思雨
[考研] 求调剂 +3 农业工程与信息� 2026-04-04 3/150 2026-04-04 12:19 by 舍而后得
[考研] 357求调剂 +13 1050389037 2026-04-03 13/650 2026-04-03 22:27 by 无际的草原
[考研] 英一数一408，总分284，二战真诚求调剂 +13 12.27 2026-03-30 15/750 2026-04-03 14:41 by 氮气气气
[考研] 生物学硕341求调剂 +4 你笑起来像云朵 2026-04-03 4/200 2026-04-03 10:32 by macy2011
[考研] 生物学求调剂 +3 15064154688 2026-04-03 3/150 2026-04-03 10:28 by macy2011
[考研] 一志愿北京科技大学材料学硕328分求调剂 +6 1段时间 2026-03-31 7/350 2026-04-02 13:57 by 3041
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-04-02 4/200 2026-04-02 13:03 by yulian1987
[考研] 08开头看过来！！！ +4 wwwwffffff 2026-03-31 6/300 2026-04-02 11:42 by 均值回归
[考研] 270调剂 +7 maxjxbsk 2026-04-02 7/350 2026-04-02 09:50 by yulian1987
[考研] 土木304求调剂 +6 兔突突突， 2026-03-31 7/350 2026-04-02 09:06 by coolminer
[考研] 285求调剂 +7 AZMK 2026-03-30 13/650 2026-04-01 17:00 by 七度不信任
[考研] 物理学调剂 +4 小羊36 2026-03-30 4/200 2026-03-31 16:16 by lishahe
[考研] 一志愿大连理工大学，机械工程学硕，341 +3 西瓜田的守望者 2026-03-30 3/150 2026-03-31 11:08 by asdfzly
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭