应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 定量PCR的熔解曲线分析和PCRmix的选择
71/1返回列表
查看: 2258  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

xiao7270

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 定量PCR的熔解曲线分析和PCRmix的选择

各位定量PCR的虫侠们：
小虫第一次做定量PCR，关于熔解曲线的分析程序问题很大！我用的是ABI 7900HT仪器，做相对定量的时候，熔解曲线分析程序不能直接加在反应程序后面。程序跑完后，手动开始熔解曲线的分析，用的是仪器自带的默认程序，95度15s，60度15s，95度15s，40个循环。然而此时，问题出现了，仪器自动分析该程序跑完需要7.5小时，我等了3个循环，约用了50分钟。
请做过定量PCR 的虫侠们帮我分析一下，问题到底出在哪里？
--------------------------------我是第一和第二问题的分割线-----------------------------------
另外一个问题，有不带UDG酶的Fast Sybr Green Master Mix的产品么（无论哪家公司）？或者使用带有UDG酶的qPCRmix，而在反应开始之前不设置50度的UDG酶反应，应该不会对反应有太大影响吧？

[ Last edited by xiao7270 on 2012-7-4 at 13:30 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-07-04 08:42:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chlorella409

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xiao7270: 金币+2, 谢谢！不好意思写错了，是50度2min 2012-07-04 13:31:05
我们使用没有UDG的Mix,区别应该不会很大，但是我觉得你的UDG反应时间是不是设置错了，不可能要50分钟吧
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-04 11:19:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chlorella409

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xiao7270: 金币+2, 谢谢提供详细信息！看样子论坛里用7900的虫很少啊，呵呵 2012-07-05 11:02:29
Q1,使用含UDG的mix，2分钟UDG反应时间，加上40个循环30min,总的时间应该在一小时以内，我们使用7500 FAST大概在一小时二十分钟左右，因为7500自带溶解曲线设定，扩增完成后自动做溶解曲线，整个实验在两小时左右，所以我觉得你的7.5个小时是不是程序设置上有问题。Q2，UDG酶是用于PCR过程中扩增产物防污染的，根据个人需要随便选择而已
赞一下 回复此楼
3楼2012-07-04 13:47:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiao7270

至尊木虫 (著名写手)
lz弄清楚了，关于7900不能直接设置熔解曲线的事，问了ABI公司的技术支持，说，设置好程序后，保存，关闭该程序，再重新打开该程序，就可以添加熔解曲线分析了。另外，该分析是一个循环，即95度15s，60度15s，95度15s，升温过程缓慢，约20～30分钟。
第二个问题，有UDG酶和无UDG酶对反应本身影响不大，主要是看使用者是不是怕污染，怕的话就用50度2min保温一下，不用该过程也行。
赞一下 回复此楼
5楼2012-07-05 11:07:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chlorella409

木虫 (正式写手)
祝实验成功
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

xiao7270
6楼2012-07-05 11:22:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiao7270

至尊木虫 (著名写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by chlorella409 at 2012-07-05 11:22:44
祝实验成功

收到祝福很开心，
回复此楼
7楼2012-07-05 14:59:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
yingying15884楼
2012-07-04 17:22   回复  
xiao7270: 金币+1, 文坛精英也来蹭金币，满足一下该至尊吧 2012-07-05 11:03:07
祝福祝福
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiao7270 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭