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yumeng_6964

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 2343.4
帖子: 268
在线: 342小时
虫号: 1317780

[交流] 请大神帮我看看我的实时定量PCR结果分析一下失败的原因有图有真相

有图有真相吖
帮忙分析一下谢谢
所用试剂和仪器回复在二楼

Amplification Plot2.jpg

Melt Curve.jpg

Multicomponent Plot.jpg

Raw Data Plot.jpg

RQ vs Sample.jpg

w169h1317780_1378109714_236.jpg

w239h1317780_1378109712_597.jpg

[ Last edited by yumeng_6964 on 2013-9-3 at 10:44 ]

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1楼2013-09-03 10:43:30

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跳舞的骆驼

金虫 (初入文坛)

应助: 7 (幼儿园)
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虫号: 989609

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
yumeng_6964: 金币+2, 我这次是没加Rox的而且加液过程稍微有点问题我已经加了延伸的步骤试了一下第二次做效果就很好啦~ 2013-09-05 15:54:27

好厉害，怎么能做成这样子呢。
扩增曲线是不是设置的问题，你有没有加rox，没加就设置none。
40循环(95度3s+60度30s),这点加一步72度延伸。
你确定你的模板普通PCR没有问题。

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4楼2013-09-05 13:22:15

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yumeng_6964

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 2343.4
帖子: 268
在线: 342小时
虫号: 1317780

反应试剂是Takara SYBR Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus)；
反应条件按照说明书来95度30s,40循环(95度3s+60度30s),溶解曲线是：95度15s+60度1min+95度15s；
反应仪器是AB 7500 fast.

操作都很小心，冰上进行。每一步都离心，没有气泡。

谢谢啦！！！

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2楼2013-09-03 10:44:19

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