24小时热门版块排行榜    

查看: 2871  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

冯可

新虫 (初入文坛)


[交流] SYBR 荧光定量PCR 阴性对照问题

反应条件:
98℃ 2min
40循环
98℃ 30s
53.6℃ 30s
72℃ 30s
72℃  7min
反应体系:
MightAmp mix (takara ) 10μL
引物(2μM)             1μL
引物(2μM)             1μL
模板                     2μL
水                       6μL
                                          20μL体系
问题:
1.前辈们看看 我这个图,无模板对照和阴性对照都出现扩增是不是不行啊?怎么去除呢?引物浓度调节我试过了,降低引物浓度是,阴性对照也会随之消失,但是却应先检出限。 将循环数减少至30个循环,阴性扩增会消失,但是不知道可不可性,同时还是影响检出限。 我在考虑增大退火温度是否可行呢?
求大家指点。郁闷啊 ~~~ 小弟刚入手。

图标说明结果说明:
孔        荧光基团        样本类型                   Cq        解链温度 1
A01-Ch5        SYBR        阳性对照          13.04        80.19
A02-Ch5        SYBR        阳性对照           13.17        80.13
A03-Ch5        SYBR        阳性对照           12.92        79.97
A04-Ch5        SYBR        阳性对照                 17.81        80
C03-Ch5        SYBR        阳性对照                 18.05        80.01
C01-Ch5        SYBR        无模板对照        32.32        80.17
C02-Ch5        SYBR        无模板对照        32.37        80.04
C05-Ch5        SYBR        阴性对照                 32.68        79.93
C06-Ch5        SYBR        阴性对照                  33.09        79.86
SYBR 荧光定量PCR 阴性对照问题
1.png


SYBR 荧光定量PCR 阴性对照问题-1
2.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sfj311

新虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我做的也是这样,阴性很不稳定,至今还没找到答案
5楼2014-09-15 10:56:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

86964109

木虫 (小有名气)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励交流! 2013-09-13 17:14:19
你这个是不是存在气溶胶污染啊
2楼2013-09-13 08:16:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shwjs88

银虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
以前碰到过,跑到别的楼上借了点水,高压后再用,解决了。就是污染

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2013-09-14 13:34:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxfans

铁杆木虫 (著名写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不用担心 我用的引物一直都有这样的问题。理论上说ct在33以上算是超出检测灵敏度范围的不可信数据。而且我每次ntc都有这样的现象,很难做到不出扩增的阴性对照。有说法是在加模板时换到另外一个房间(有条件的可以单批出一个房间做定量),但我没试过
4楼2013-09-15 10:26:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +11 yunziaaaaa 2026-03-01 13/650 2026-03-02 21:59 by sunny81
[考研] 理学,工学,农学调剂,少走弯路,这里欢迎您! +5 likeihood 2026-03-02 8/400 2026-03-02 20:39 by ji493940045
[考研] 求调剂 +7 repeatt?t 2026-02-28 7/350 2026-03-02 20:34 by hypershenger
[考研] 材料复试调剂 +5 学材料的点 2026-03-01 6/300 2026-03-02 20:01 by hypershenger
[考研] 271求调剂 +3 Ricardo1113 2026-03-02 3/150 2026-03-02 19:53 by zhukairuo
[考研] 0854总分272 +3 打小就是老实人 2026-03-02 4/200 2026-03-02 19:49 by 求调剂zz
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 15/750 2026-03-02 18:47 by caszguilin
[考研] 清华大学 材料与化工 353分求调剂 +4 awaystay 2026-03-02 5/250 2026-03-02 17:33 by yeahyou
[考研] 0703 总分319求调剂 +3 Xinyuu 2026-03-02 3/150 2026-03-02 17:20 by houyaoxu
[考研] 材料与化工328求调剂 +3 。,。,。,。i 2026-03-02 3/150 2026-03-02 13:09 by houyaoxu
[考研] 一志愿郑大材料学硕298分,求调剂 +6 wsl111 2026-03-01 6/300 2026-03-02 11:00 by ydudjddnd
[考研] 279求调剂 +3 dua1 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:23 by 大脸蛋子
[基金申请] 成果系统访问量大,请一小时后再尝试。---NSFC啥时候好哦,已经两天这样了 +4 NSFC2026我来了 2026-02-28 4/200 2026-03-01 22:37 by 铁门栓
[考研] 299求调剂 +3 Y墨明棋妙Y 2026-02-28 5/250 2026-03-01 21:01 by tangxiaotian
[考研] 298求调剂 +6 axyz3 2026-02-28 6/300 2026-03-01 19:00 by 18137688336
[考研] 328求调剂 +3 aaadim 2026-03-01 5/250 2026-03-01 17:29 by njzyff
[考研] 290求调剂 +9 材料专硕调剂; 2026-02-28 11/550 2026-03-01 17:21 by sunny81
[考研] 313求调剂 +3 水流年lc 2026-02-28 3/150 2026-03-01 16:01 by 新能源达人
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-02-28 7/350 2026-03-01 15:14 by wjLi2017
[考研] 寻找调剂 +4 LYidhsjabdj 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:56 by sunny81
信息提示
请填处理意见