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heather-guo

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[求助] SYBR荧光定量PCR检测病毒的表达量，模版的要求

本人是第一次做定量，有好多问题搞不懂，首先是模版，我见文章里有说提取RNA，反转录cDNA以后跑，而有的是提取DNA以后连接转化构建质粒，提取质粒DNA为模版，这是怎么回事。跑定量，对模版的浓度要求高吗，为稀释之前的初始浓度最低要求多少

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1楼 2013-07-15 15:56:01

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cicelyzh

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【答案】应助回帖

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gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-07-18 14:14:50

荧光定量PCR是检测模板DNA分子拷贝数的方法。做反转录的目的是想用荧光定量的方法检测RNA的拷贝数，而RNA只有在反转录成cDNA后才能被DNA聚合酶识别并得到扩增。模板的浓度当然有一定限制，浓度太高或者太低会使扩增超出线性范围，一般CT数目在15-30比较合适。

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2楼2013-07-16 02:15:28

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heather-guo

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引用回帖:

2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-16 02:15:28
荧光定量PCR是检测模板DNA分子拷贝数的方法。做反转录的目的是想用荧光定量的方法检测RNA的拷贝数，而RNA只有在反转录成cDNA后才能被DNA聚合酶识别并得到扩增。模板的浓度当然有一定限制，浓度太高或者太低会使扩增 ...

我想通过荧光定量PCR检测病毒是否有增值，文章里提到提取RNA，反转录成CDNA跑定量，但我是DNA 病毒，为什么要提RNA 呢

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3楼2013-07-18 12:33:45

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