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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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heather-guo

新虫 (初入文坛)

[求助] SYBR荧光定量PCR检测病毒的表达量,模版的要求

本人是第一次做定量,有好多问题搞不懂,首先是模版,我见文章里有说提取RNA,反转录cDNA以后跑,而有的是提取DNA以后连接转化构建质粒,提取质粒DNA为模版,这是怎么回事。跑定量,对模版的浓度要求高吗,为稀释之前的初始浓度最低要求多少
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励应助! 2013-07-18 14:14:50
荧光定量PCR是检测模板DNA分子拷贝数的方法。做反转录的目的是想用荧光定量的方法检测RNA的拷贝数,而RNA只有在反转录成cDNA后才能被DNA聚合酶识别并得到扩增。模板的浓度当然有一定限制,浓度太高或者太低会使扩增超出线性范围,一般CT数目在15-30比较合适。
2楼2013-07-16 02:15:28
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普通回帖

heather-guo

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-16 02:15:28
荧光定量PCR是检测模板DNA分子拷贝数的方法。做反转录的目的是想用荧光定量的方法检测RNA的拷贝数,而RNA只有在反转录成cDNA后才能被DNA聚合酶识别并得到扩增。模板的浓度当然有一定限制,浓度太高或者太低会使扩增 ...

我想通过荧光定量PCR检测病毒是否有增值,文章里提到提取RNA,反转录成CDNA跑定量,但我是DNA 病毒,为什么要提RNA 呢
3楼2013-07-18 12:33:45
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wangweida2

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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heather-guo(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-07-18 14:15:41
heather-guo: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-07-19 16:10:35
DNA病毒检测不需要逆转录。检测病毒是否有增值再具体一些呢?通常病毒检测都是绝对定量检测。需要已知浓度的标准品梯度稀释做标准曲线。
4楼2013-07-18 12:41:12
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by heather-guo at 2013-07-18 12:33:45
我想通过荧光定量PCR检测病毒是否有增值,文章里提到提取RNA,反转录成CDNA跑定量,但我是DNA 病毒,为什么要提RNA 呢...

你可以去查一下,该病毒复制的时候是不是以RNA为中间体?如果是的话,PCR检测病毒是否有增值,提取RNA就不足为怪了!
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2013-07-18 14:16:54
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by heather-guo at 2013-07-18 12:33:45
我想通过荧光定量PCR检测病毒是否有增值,文章里提到提取RNA,反转录成CDNA跑定量,但我是DNA 病毒,为什么要提RNA 呢...

如果是DNA样品,当然不用做反转录了。一般DNA样品做绝对定量,就是确定样品中模板基因的拷贝数。
6楼2013-07-19 01:01:12
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heather-guo

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-19 01:01:12
如果是DNA样品,当然不用做反转录了。一般DNA样品做绝对定量,就是确定样品中模板基因的拷贝数。...

恩,对的,后来跟师姐讨论了一下,我是比较实验组之间的差异,做相对定量,直接用DNA 稀释去做标准曲线就可以啦
7楼2013-07-19 16:09:56
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heather-guo

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wangweida2 at 2013-07-18 12:41:12
DNA病毒检测不需要逆转录。检测病毒是否有增值再具体一些呢?通常病毒检测都是绝对定量检测。需要已知浓度的标准品梯度稀释做标准曲线。

恩,对的,后来跟师姐讨论了一下,我是比较实验组之间的差异,做相对定量,直接用DNA 稀释去做标准曲线就可以啦
8楼2013-07-19 16:12:02
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heather-guo

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by gyesang at 2013-07-18 14:16:54
你可以去查一下,该病毒复制的时候是不是以RNA为中间体?如果是的话,PCR检测病毒是否有增值,提取RNA就不足为怪了!...

恩,知道了,谢谢你
9楼2013-07-19 16:13:55
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晚安_旧时光

新虫 (初入文坛)

咨询一下,我想测我纯化的病毒的浓度,但是我的病毒并不能产生噬菌斑,所以想用实时定量PCR检测,具体该怎么进行呢``
10楼2015-04-21 10:18:03
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