24小时热门版块排行榜    

查看: 2822  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

heather-guo

新虫 (初入文坛)

[求助] SYBR荧光定量PCR检测病毒的表达量,模版的要求

本人是第一次做定量,有好多问题搞不懂,首先是模版,我见文章里有说提取RNA,反转录cDNA以后跑,而有的是提取DNA以后连接转化构建质粒,提取质粒DNA为模版,这是怎么回事。跑定量,对模版的浓度要求高吗,为稀释之前的初始浓度最低要求多少
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangweida2

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
heather-guo(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-07-18 14:15:41
heather-guo: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-07-19 16:10:35
DNA病毒检测不需要逆转录。检测病毒是否有增值再具体一些呢?通常病毒检测都是绝对定量检测。需要已知浓度的标准品梯度稀释做标准曲线。
4楼2013-07-18 12:41:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励应助! 2013-07-18 14:14:50
荧光定量PCR是检测模板DNA分子拷贝数的方法。做反转录的目的是想用荧光定量的方法检测RNA的拷贝数,而RNA只有在反转录成cDNA后才能被DNA聚合酶识别并得到扩增。模板的浓度当然有一定限制,浓度太高或者太低会使扩增超出线性范围,一般CT数目在15-30比较合适。
2楼2013-07-16 02:15:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heather-guo

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-16 02:15:28
荧光定量PCR是检测模板DNA分子拷贝数的方法。做反转录的目的是想用荧光定量的方法检测RNA的拷贝数,而RNA只有在反转录成cDNA后才能被DNA聚合酶识别并得到扩增。模板的浓度当然有一定限制,浓度太高或者太低会使扩增 ...

我想通过荧光定量PCR检测病毒是否有增值,文章里提到提取RNA,反转录成CDNA跑定量,但我是DNA 病毒,为什么要提RNA 呢
3楼2013-07-18 12:33:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by heather-guo at 2013-07-18 12:33:45
我想通过荧光定量PCR检测病毒是否有增值,文章里提到提取RNA,反转录成CDNA跑定量,但我是DNA 病毒,为什么要提RNA 呢...

你可以去查一下,该病毒复制的时候是不是以RNA为中间体?如果是的话,PCR检测病毒是否有增值,提取RNA就不足为怪了!
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2013-07-18 14:16:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[职场人生] 40+中年人失业后,还能找到好工作吗? +11 xqy2009 2026-10-13 13/650 2026-10-15 21:32 by bear2007
[有机交流] 用NBS溴化时溶剂除了CCl4外还有什么 +3 18834002860 2026-10-12 6/300 2026-10-15 14:30 by 长沙摩尔信息科�
[基金申请] 申请科研项目纯靠实力能成功吗? 200+7 David1982 2026-10-13 11/550 2026-10-15 10:30 by zyqchem
[硕博家园] 极限拉扯,如何抉择 +11 Isak0320 2026-10-12 15/750 2026-10-14 21:55 by 猫鱼不是鱼
[论文投稿] 二审4个多月了还是Awaiting Reviewer Scores 10+3 纳斯达克ML 2026-10-11 4/200 2026-10-14 17:30 by babero
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了,离AI做有机合成还有多远? +8 wangyl_123 2026-10-10 13/650 2026-10-14 15:12 by zuesli
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么? +4 好运来~9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[公派出国] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷!
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
信息提示
请填处理意见