应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SYBR荧光定量PCR检测病毒的表达量，模版的要求
51/1返回列表
查看: 2186  |  回复: 11
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

heather-guo

新虫 (初入文坛)

[求助] SYBR荧光定量PCR检测病毒的表达量，模版的要求

本人是第一次做定量，有好多问题搞不懂，首先是模版，我见文章里有说提取RNA，反转录cDNA以后跑，而有的是提取DNA以后连接转化构建质粒，提取质粒DNA为模版，这是怎么回事。跑定量，对模版的浓度要求高吗，为稀释之前的初始浓度最低要求多少
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2013-07-15 15:56:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangweida2

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
heather-guo(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-18 14:15:41
heather-guo: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-07-19 16:10:35
DNA病毒检测不需要逆转录。检测病毒是否有增值再具体一些呢？通常病毒检测都是绝对定量检测。需要已知浓度的标准品梯度稀释做标准曲线。
赞一下 回复此楼
4楼2013-07-18 12:41:12
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-07-18 14:14:50
荧光定量PCR是检测模板DNA分子拷贝数的方法。做反转录的目的是想用荧光定量的方法检测RNA的拷贝数，而RNA只有在反转录成cDNA后才能被DNA聚合酶识别并得到扩增。模板的浓度当然有一定限制，浓度太高或者太低会使扩增超出线性范围，一般CT数目在15-30比较合适。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-07-16 02:15:28
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heather-guo

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-16 02:15:28
荧光定量PCR是检测模板DNA分子拷贝数的方法。做反转录的目的是想用荧光定量的方法检测RNA的拷贝数，而RNA只有在反转录成cDNA后才能被DNA聚合酶识别并得到扩增。模板的浓度当然有一定限制，浓度太高或者太低会使扩增 ...

我想通过荧光定量PCR检测病毒是否有增值，文章里提到提取RNA，反转录成CDNA跑定量，但我是DNA 病毒，为什么要提RNA 呢
赞一下 回复此楼
3楼2013-07-18 12:33:45
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by heather-guo at 2013-07-18 12:33:45
我想通过荧光定量PCR检测病毒是否有增值，文章里提到提取RNA，反转录成CDNA跑定量，但我是DNA 病毒，为什么要提RNA 呢...

你可以去查一下，该病毒复制的时候是不是以RNA为中间体？如果是的话，PCR检测病毒是否有增值，提取RNA就不足为怪了！
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2013-07-18 14:16:54
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭