应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » SYBR 荧光定量PCR 阴性对照问题
汕头大学海洋科学接受调剂
81/1返回列表
查看: 2949  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

冯可

新虫 (初入文坛)

[交流] SYBR 荧光定量PCR 阴性对照问题

反应条件：
98℃ 2min
40循环
98℃ 30s
53.6℃ 30s
72℃ 30s
72℃  7min
反应体系：
MightAmp mix （takara ） 10μL
引物（2μM）             1μL
引物（2μM）             1μL
模板                     2μL
水                       6μL
                                          20μL体系
问题：
1.前辈们看看 我这个图，无模板对照和阴性对照都出现扩增是不是不行啊？怎么去除呢？引物浓度调节我试过了，降低引物浓度是，阴性对照也会随之消失，但是却应先检出限。 将循环数减少至30个循环，阴性扩增会消失，但是不知道可不可性，同时还是影响检出限。 我在考虑增大退火温度是否可行呢？
求大家指点。郁闷啊 ~~~ 小弟刚入手。

图标说明结果说明：
孔        荧光基团        样本类型                   Cq        解链温度 1
A01-Ch5        SYBR        阳性对照          13.04        80.19
A02-Ch5        SYBR        阳性对照           13.17        80.13
A03-Ch5        SYBR        阳性对照           12.92        79.97
A04-Ch5        SYBR        阳性对照                 17.81        80
C03-Ch5        SYBR        阳性对照                 18.05        80.01
C01-Ch5        SYBR        无模板对照        32.32        80.17
C02-Ch5        SYBR        无模板对照        32.37        80.04
C05-Ch5        SYBR        阴性对照                 32.68        79.93
C06-Ch5        SYBR        阴性对照                  33.09        79.86
SYBR 荧光定量PCR 阴性对照问题
1.png


SYBR 荧光定量PCR 阴性对照问题-1
2.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2013-09-12 21:05:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

86964109

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-09-13 17:14:19
你这个是不是存在气溶胶污染啊
赞一下 回复此楼
2楼2013-09-13 08:16:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shwjs88

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
以前碰到过，跑到别的楼上借了点水，高压后再用，解决了。就是污染

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
3楼2013-09-14 13:34:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxfans

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不用担心 我用的引物一直都有这样的问题。理论上说ct在33以上算是超出检测灵敏度范围的不可信数据。而且我每次ntc都有这样的现象，很难做到不出扩增的阴性对照。有说法是在加模板时换到另外一个房间（有条件的可以单批出一个房间做定量），但我没试过
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2013-09-15 10:26:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sfj311

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我做的也是这样，阴性很不稳定，至今还没找到答案
赞一下 回复此楼
5楼2014-09-15 10:56:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吕木木

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
怎么做阴性对照啊，急死了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2016-01-25 01:27:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吕木木

新虫 (小有名气)
错了，是怎么做阳性对照啊

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2016-01-25 01:27:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kx361

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
气溶胶污染，之前我也遇见过，注意加试剂和加模板移液枪分开，两个房间加样，用过的垃圾缸及时清理，加样顺序，先试剂，后阴性对照，先样品，加完后盖上盖子在加阳性模板，具体情况，具体对待。我一般40个循环，阴性对照没有值

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2016-01-25 05:53:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 冯可 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料工程281还有调剂机会吗 +37 xaw. 2026-04-11 38/1900 2026-04-14 08:29 by 科宇老师
[考研] 2026硕士调剂_能动_河南农业大学 +4 河南农业大学-能 2026-04-12 4/200 2026-04-13 22:01 by bljnqdcc
[考研] 一志愿西交机械专硕求调剂 +9 求上岸的小王 2026-04-10 9/450 2026-04-13 16:08 by jiangguiquan11
[考研] 考研二轮调剂 +10 故人?? 2026-04-09 10/500 2026-04-13 09:55 by szhize
[考研] 求调剂 +9 吃口冰激凌 2026-04-07 9/450 2026-04-13 08:46 by 紫曦紫棋
[考研] 366求调剂 +9 不知名的小卅 2026-04-11 9/450 2026-04-13 01:19 by 幸免 ..
[考研] 346分，工科0854求调剂，专硕 +6 moser233 2026-04-12 7/350 2026-04-12 22:11 by fqwang
[考研] 0854调剂 +12 长弓傲 2026-04-09 13/650 2026-04-12 09:56 by 逆水乘风
[考研] 085404 293求调剂 +9 勇远库爱314 2026-04-08 9/450 2026-04-12 02:24 by 秋豆菜芽
[考研] 药学专硕调剂 +8 ? 一路生?花? 2026-04-10 10/500 2026-04-11 21:21 by zhouxiaoyu
[考研] 机械专硕270求调剂，接受跨专业 +12 老师看看我吧aba 2026-04-09 14/700 2026-04-11 10:21 by laoshidan
[考研] 广东省 085601 329分求调剂 +14 Eddieddd 2026-04-10 14/700 2026-04-11 09:58 by bljnqdcc
[考研] 263能源动力专硕求调剂 +3 加大号饭盒袋 2026-04-10 3/150 2026-04-10 22:23 by 286640313
[考研] 0858求调剂 5+5 Gky09300550， 2026-04-10 8/400 2026-04-10 19:13 by chemisry
[考研] 265求调剂 +12 风说她早忘了 2026-04-10 13/650 2026-04-10 18:56 by chemisry
[考研] 一志愿中南大学物理学，英一66，求调剂 +4 长烟旖旎 2026-04-08 5/250 2026-04-10 10:31 by 颖果儿
[考研] 一志愿中科大070300化学，314分求调剂 +12 wakeluofu 2026-04-09 12/600 2026-04-10 09:57 by liuhuiying09
[考研] 本科211 工科085400 280分求调剂 可跨专业 +3 LZH（等待调剂中 2026-04-09 3/150 2026-04-09 21:29 by wutongshun
[考研] 328求调剂 +17 lftmya 2026-04-07 18/900 2026-04-09 08:05 by 5268321
[考研] 机械调剂 +3 zzzbcb 2026-04-07 3/150 2026-04-07 22:19 by hemengdong
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭