应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » SYBR 荧光定量PCR 阴性对照问题
51/1返回列表
查看: 2867  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

冯可

新虫 (初入文坛)

[交流] SYBR 荧光定量PCR 阴性对照问题

反应条件：
98℃ 2min
40循环
98℃ 30s
53.6℃ 30s
72℃ 30s
72℃  7min
反应体系：
MightAmp mix （takara ） 10μL
引物（2μM）             1μL
引物（2μM）             1μL
模板                     2μL
水                       6μL
                                          20μL体系
问题：
1.前辈们看看 我这个图，无模板对照和阴性对照都出现扩增是不是不行啊？怎么去除呢？引物浓度调节我试过了，降低引物浓度是，阴性对照也会随之消失，但是却应先检出限。 将循环数减少至30个循环，阴性扩增会消失，但是不知道可不可性，同时还是影响检出限。 我在考虑增大退火温度是否可行呢？
求大家指点。郁闷啊 ~~~ 小弟刚入手。

图标说明结果说明：
孔        荧光基团        样本类型                   Cq        解链温度 1
A01-Ch5        SYBR        阳性对照          13.04        80.19
A02-Ch5        SYBR        阳性对照           13.17        80.13
A03-Ch5        SYBR        阳性对照           12.92        79.97
A04-Ch5        SYBR        阳性对照                 17.81        80
C03-Ch5        SYBR        阳性对照                 18.05        80.01
C01-Ch5        SYBR        无模板对照        32.32        80.17
C02-Ch5        SYBR        无模板对照        32.37        80.04
C05-Ch5        SYBR        阴性对照                 32.68        79.93
C06-Ch5        SYBR        阴性对照                  33.09        79.86
SYBR 荧光定量PCR 阴性对照问题
1.png


SYBR 荧光定量PCR 阴性对照问题-1
2.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2013-09-12 21:05:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kx361

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
气溶胶污染，之前我也遇见过，注意加试剂和加模板移液枪分开，两个房间加样，用过的垃圾缸及时清理，加样顺序，先试剂，后阴性对照，先样品，加完后盖上盖子在加阳性模板，具体情况，具体对待。我一般40个循环，阴性对照没有值

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2016-01-25 05:53:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

86964109

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-09-13 17:14:19
你这个是不是存在气溶胶污染啊
赞一下 回复此楼
2楼2013-09-13 08:16:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shwjs88

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
以前碰到过，跑到别的楼上借了点水，高压后再用，解决了。就是污染

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
3楼2013-09-14 13:34:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxfans

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不用担心 我用的引物一直都有这样的问题。理论上说ct在33以上算是超出检测灵敏度范围的不可信数据。而且我每次ntc都有这样的现象，很难做到不出扩增的阴性对照。有说法是在加模板时换到另外一个房间（有条件的可以单批出一个房间做定量），但我没试过
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2013-09-15 10:26:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856调剂 +8 刘梦微 2026-02-28 8/400 2026-03-02 19:23 by caszguilin
[考研] 290分材料工程085601求调剂 数二英一 +4 llx0610 2026-03-02 4/200 2026-03-02 19:19 by caszguilin
[考研] 295求调剂。一志愿报考郑州大学化学工艺学硕，总分295分 +7 yl1 2026-03-02 7/350 2026-03-02 19:03 by zhukairuo
[考研] 一志愿中石油（华东）本科齐鲁工业大学 +3 石能伟 2026-03-02 3/150 2026-03-02 18:54 by caszguilin
[考研] 290求调剂 +6 ErMiao1020 2026-03-02 6/300 2026-03-02 18:14 by lature00
[考研] 一志愿华中科技大学，化学专业344分，求调剂 +3 邢xing1 2026-03-02 3/150 2026-03-02 17:32 by houyaoxu
[考博] 诚招农业博士 +3 心欣向荣 2026-02-28 3/150 2026-03-02 13:33 by 时间不狗
[考研] 26考研报考西工大材料308分求调剂 +4 weizhong123 2026-03-01 4/200 2026-03-02 12:46 by 无际的草原
[考研] 292求调剂 +7 yhk_819 2026-02-28 7/350 2026-03-02 12:43 by 无际的草原
[考研] 276求调剂 +4 路lyh123 2026-02-28 5/250 2026-03-02 11:20 by yuchj
[考研] 275求调剂 +3 L-xin? 2026-03-01 6/300 2026-03-02 10:22 by 热情沙漠
[考研] 322求调剂 +3 熊境喆 2026-03-01 3/150 2026-03-02 08:44 by houyaoxu
[考研] 材料复试调剂 +4 学材料的点 2026-03-01 5/250 2026-03-02 08:26 by houyaoxu
[考研] 298求调剂 +6 axyz3 2026-02-28 6/300 2026-03-01 19:00 by 18137688336
[考研] 285求调剂 +8 满头大汗的学生 2026-02-28 8/400 2026-03-01 16:47 by caszguilin
[考研] 295复试调剂 +3 简木ChuFront 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:27 by zzxw520th
[考研] 298求调剂 +9 人间唯你是清欢 2026-02-28 12/600 2026-03-01 14:23 by Ducount.Y
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭