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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR阳性检测结果，空载体和水都能扩的出来，怎么回事呢？
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王玉民

新虫 (小有名气)

[求助] PCR阳性检测结果，空载体和水都能扩的出来，怎么回事呢？

我构建好的表达载体，在用PCR进行阳性检测的时候以空载体和水做对照，结果都能扩出目标片段，换了水，灭菌了一夜，结果还是一样，这是怎么回事？什么原因呢？请教高手指点。
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心晴
1楼 2011-11-10 15:38:17
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misshome

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
wanhscn(金币+4): Good! 2011-11-10 21:04:47
wanhscn(金币+4): Good! 2011-11-10 21:04:49
1.首先确定引物是否特异，估计这个可能性不大。
2.PCR隐性对照出条件，你需要更换PCR用的水，酶，dNTP，buffer，酶，任何一个污染都有可能导致隐性对照出带。在做PCR的时候要特别小心。
3.PCR鉴定准确性不足，建议你提取PCR鉴定的阳性质粒，酶切鉴定。
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做开心快乐阳光的自己
2楼2011-11-10 20:34:42
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 欢迎分享经验 2011-11-17 19:09:31
楼主用这对引物扩增过质粒等高浓度的模板吗？我们曾经碰到的情况是，由于之前以质粒为模板扩增时，质粒浓度高，引物污染，后来的扩增不论加不加模板都有目的带，楼主可以看一下是不是引物的问题，祝顺利！
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jiayoubashaonian
3楼2011-11-10 21:50:08
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dears56

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
4楼2011-11-17 13:00:06
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宗德inter

铜虫 (初入文坛)
是不是buffer被污染了？是不是你要扩增的是人体内就有的序列？
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努力吧phD
5楼2011-11-17 13:54:13
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