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王玉民

新虫 (小有名气)

[求助] PCR阳性检测结果,空载体和水都能扩的出来,怎么回事呢?

我构建好的表达载体,在用PCR进行阳性检测的时候以空载体和水做对照,结果都能扩出目标片段,换了水,灭菌了一夜,结果还是一样,这是怎么回事?什么原因呢?请教高手指点。
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心晴
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misshome

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
wanhscn(金币+4): Good! 2011-11-10 21:04:47
wanhscn(金币+4): Good! 2011-11-10 21:04:49
1.首先确定引物是否特异,估计这个可能性不大。
2.PCR隐性对照出条件,你需要更换PCR用的水,酶,dNTP,buffer,酶,任何一个污染都有可能导致隐性对照出带。在做PCR的时候要特别小心。
3.PCR鉴定准确性不足,建议你提取PCR鉴定的阳性质粒,酶切鉴定。
做开心快乐阳光的自己
2楼2011-11-10 20:34:42
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): 欢迎分享经验 2011-11-17 19:09:31
楼主用这对引物扩增过质粒等高浓度的模板吗?我们曾经碰到的情况是,由于之前以质粒为模板扩增时,质粒浓度高,引物污染,后来的扩增不论加不加模板都有目的带,楼主可以看一下是不是引物的问题,祝顺利!
jiayoubashaonian
3楼2011-11-10 21:50:08
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dears56

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

4楼2011-11-17 13:00:06
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宗德inter

铜虫 (初入文坛)

是不是buffer被污染了?是不是你要扩增的是人体内就有的序列?
努力吧phD
5楼2011-11-17 13:54:13
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