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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr扩出来奇怪的条带
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mtz0305

金虫 (小有名气)

[求助] pcr扩出来奇怪的条带已有3人参与

lz近日做pcr，要扩一条800bpr条带，但是扩了好多次没有扩出来目的条带，但是很奇怪总是在最上边有一条10000多bp的条带，延伸时间才50s呀，怎么会出来这条带呢，现在确认pcr体系，模板都是没有问题的。做了梯度pcr也是一样的结果。试着回收测个序，结果回收两次都回收 不到。附件里用的marker 是10000的。。同行们，帮帮忙，快纠结死了。

pcr扩出来奇怪的条带
huaiiyi4.jpg
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做自己最好！
1楼2014-03-20 16:32:11
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
是不是你的模板量加的太多了？
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2楼2014-03-20 18:28:40
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mtz0305

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-20 18:28:40
是不是你的模板量加的太多了？

100微升加1微升，扩另一个片段扩出来了。应该不多吧
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做自己最好！
3楼2014-03-20 18:50:16
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knightdream

金虫 (初入文坛)
你的模板是什么？
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4楼2014-03-20 18:52:00
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mjt2007

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mtz0305(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 19:24:52
上面这条带肯定是模板，一般PCR肯定也扩不出这么长的条带啊
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Theworldisnotinyourbooksandmaps,itisoutthere.
5楼2014-03-20 18:57:21
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-03-20 19:54:00
你模板是不是一万左右，模板加多了，你把模板稀释一千倍再做一次试试
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hehe
6楼2014-03-20 19:29:38
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mtz0305 at 2014-03-20 18:50:16
100微升加1微升，扩另一个片段扩出来了。应该不多吧...

恩  ，我最近遇到的是一样的体系条件，结果扩不出来了，哎。
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7楼2014-03-20 20:01:18
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zjuwrx

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mtz0305(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 19:25:01
感觉是模板的样子，50s的延伸不可能出来这么大的带。另外最好是把模板浓度测一下，虽然只加了1ul，但说不定浓度很高，所以才这么明显
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8楼2014-03-20 20:58:25
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mtz0305

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-03-20 19:29:38
你模板是不是一万左右，模板加多了，你把模板稀释一千倍再做一次试试

谢谢，我试试。不过我的模板是提的基因组，是5M的，有没有是因为是基因组降解了。
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做自己最好！
9楼2014-03-21 08:22:26
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