应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】定点突变酶切之后出问题，请教高手~~~~！！！
141/1返回列表
查看: 2544  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

maggiell

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】定点突变酶切之后出问题，请教高手~~~~！！！

我刚开始做定点突变，在PCR扩增之后出来的电泳条带是正确的，4000多bp，但是用 DpnI酶切之后的到得电泳条带就出问题了，居然跑到1000bp多去了。问了师姐，他说的得到的条带应该跟原来的差不多才对，我重复做了两三次，得到的结果都是一样的。其中有一次还做了个对照组，很奇怪，在酶切之后对照组中的模板条练居然也还能跑出来（按理说，对照组应该不出线条带才对呀。），结果跟上面说的差不多，，都是在1000多。我实在不明白啊，请前辈们帮我解解疑惑吧！！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-04-07 09:56:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

amilie030312

金虫 (正式写手)
★
maggiell(金币+4):谢谢参与
maggiell(金币+1): 2011-04-07 11:49:45
DpnI用的哪个公司的啊，扔了换个好点公司的酶吧，估计是被酶里面的污染给切碎了吧。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-04-07 11:18:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

tangbohejin

木虫之王 (文学泰斗)
★
maggiell(金币+4):谢谢参与
maggiell(金币+1): 谢谢 2011-04-07 10:21:01
系统误差考虑考虑。。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-04-07 10:07:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-04-07 14:01:47
可能你的PCR产物里含有其他Dpn I酶切位点。不如再检查一遍序列的酶切位点？
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-04-07 12:41:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

maggiell

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by amilie030312 at 2011-04-07 11:18:12:
DpnI用的哪个公司的啊，扔了换个好点公司的酶吧，估计是被酶里面的污染给切碎了吧。

我用的是TOYOBO的试剂盒。我们师姐以前用的时候都没事的，不知道我用的时候怎么会这样。
赞一下 回复此楼
5楼2011-04-07 14:33:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

郝钊

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果模板也能切出同样的片段，就说明你的模板上本身就含有DpnI这个酶切位点，而且不止一个，有序列的话分析一下酶切位点吧。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-04-07 18:29:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zboter

银虫 (正式写手)
分析一下酶切位点吧
赞一下 回复此楼
7楼2011-04-07 22:34:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by maggiell at 2011-04-07 14:33:29:
我用的是TOYOBO的试剂盒。我们师姐以前用的时候都没事的，不知道我用的时候怎么会这样。

如果片段上酶切位点没有其他的，片段没问题那就证明了小日本的东西该扔了。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2011-04-18 15:54:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yj-lzx

荣誉版主 (文坛精英)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
那就是你的产物里不止一个这样的酶切位点吧~~~
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2011-04-18 16:06:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+2): 这个建议是对的 2011-04-20 08:29:03
片段序列里含有2-3个DpnI的酶切位点，把你的电泳图发上来看一下行吗
赞一下(2人) 回复此楼
10楼2011-04-18 16:59:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏菡小屋

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+2): 可以引用回复，这样会给虫友一个提示，方便他看到及时回复你。 2011-04-20 08:29:48
我最近也在做定点突变，但是pcr出来后都没有预期的条带，大概都是1500到2000左右，请问你用的是什么pcr
赞一下(2人) 回复此楼
11楼2011-04-19 22:32:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

maggiell

新虫 (初入文坛)
嗯,谢谢大家了.
回复此楼
12楼2011-04-21 20:43:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

maggiell

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2011-04-18 16:59:32:
片段序列里含有2-3个DpnI的酶切位点，把你的电泳图发上来看一下行吗

我实在没办法了,就去问了老师,可能是他设计的引物有点问题,因为酶切后对照组的片段也都没有切完,模版量我稀释得很少了. 电泳图在实验室的电脑里,还没去刻录出来,没办法传上来.
赞一下 回复此楼
13楼2011-04-21 20:47:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

maggiell

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 夏菡小屋 at 2011-04-19 22:32:56:
我最近也在做定点突变，但是pcr出来后都没有预期的条带，大概都是1500到2000左右，请问你用的是什么pcr

inverse  pcr
回复此楼
14楼2011-04-21 21:05:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 maggiell 的主题更新
141/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +46 医学老男孩 2026-08-13 103/5150 2026-08-18 15:33 by dcqxinyang
[基金申请] 明天放榜？ +3 Shxjjxjkx 2026-08-18 3/150 2026-08-18 15:32 by a441914426
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +6 yuleib84 2026-08-18 7/350 2026-08-18 15:02 by sytp
[教师之家] 两姐妹，一个辛辛苦苦30岁工作当大学教师，另一个23岁就工作当开车教练 +3 瞬息宇宙 2026-08-11 5/250 2026-08-18 14:55 by LNP@mRNA
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 8/400 2026-08-18 11:47 by gltch
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +4 Tide man 2026-08-14 5/250 2026-08-18 11:35 by Tide man
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +5 基诺咪客 2026-08-17 6/300 2026-08-18 11:06 by hunter无悔
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭