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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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maggiell

新虫 (初入文坛)


[交流] 【求助/交流】定点突变酶切之后出问题,请教高手~~~~!!!

我刚开始做定点突变,在PCR扩增之后出来的电泳条带是正确的,4000多bp,但是用 DpnI酶切之后的到得电泳条带就出问题了,居然跑到1000bp多去了。问了师姐,他说的得到的条带应该跟原来的差不多才对,我重复做了两三次,得到的结果都是一样的。其中有一次还做了个对照组,很奇怪,在酶切之后对照组中的模板条练居然也还能跑出来(按理说,对照组应该不出线条带才对呀。),结果跟上面说的差不多,,都是在1000多。我实在不明白啊,请前辈们帮我解解疑惑吧!!!
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amilie030312

金虫 (正式写手)



maggiell(金币+4):谢谢参与
maggiell(金币+1): 2011-04-07 11:49:45
DpnI用的哪个公司的啊,扔了换个好点公司的酶吧,估计是被酶里面的污染给切碎了吧。
3楼2011-04-07 11:18:12
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tangbohejin

木虫之王 (文学泰斗)



maggiell(金币+4):谢谢参与
maggiell(金币+1): 谢谢 2011-04-07 10:21:01
系统误差考虑考虑。。
2楼2011-04-07 10:07:40
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★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-04-07 14:01:47
可能你的PCR产物里含有其他Dpn I酶切位点。不如再检查一遍序列的酶切位点?
4楼2011-04-07 12:41:33
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maggiell

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
Originally posted by amilie030312 at 2011-04-07 11:18:12:
DpnI用的哪个公司的啊,扔了换个好点公司的酶吧,估计是被酶里面的污染给切碎了吧。

我用的是TOYOBO的试剂盒。我们师姐以前用的时候都没事的,不知道我用的时候怎么会这样。
5楼2011-04-07 14:33:29
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