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anoldhorse

铁虫 (初入文坛)

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[求助] 求助，换了高保真酶扩不出来目的条带

我的目的产物是3600bp，原来用takara的LA HS可以扩出来，换了东洋纺的KOD Plus Neo怎么也扩不出来，求高手指点

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1楼 2012-07-01 14:48:59

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Marado

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, MolEPI+1, 鼓励发帖交流！ 2012-07-01 17:47:27

延伸时间要延长，你这两种酶我都没用过，但是一般情况下Taq之类的不保证酶1min最少可以延伸1000bp，pfu等高保真酶只有500~600bp，所以PCR条件也要相应的改变：
如果目的产物3600bp
用普通Taq酶延伸时间至少需要4min左右
用pfu高保真则需要8min左右
希望可以帮到你，祝楼主好运.

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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?

2楼2012-07-01 15:24:48

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Marado

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【答案】应助回帖

引用回帖:

2楼: Originally posted by Marado at 2012-07-01 15:24:48
延伸时间要延长，你这两种酶我都没用过，但是一般情况下Taq之类的不保证酶1min最少可以延伸1000bp，pfu等高保真酶只有500~600bp，所以PCR条件也要相应的改变：
如果目的产物3600bp
用普通Taq酶延伸时间至少需要4m ...

打错了几个字是Taq之类的不保真酶