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kaikal

银虫 (小有名气)

引用回帖:
20楼: Originally posted by anoldhorse at 2012-07-03 09:50:37
酶的问题我也怀疑过,持家基因可以P出来,酶应该没有问题,呵呵...

那你现在有没有用普通酶扩过啊?在相同的体系下,如果不行我觉得你在摸索一下退火温度的条件吧!
加油!!!
21楼2012-07-03 09:53:26
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anoldhorse

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
21楼: Originally posted by kaikal at 2012-07-03 09:53:26
那你现在有没有用普通酶扩过啊?在相同的体系下,如果不行我觉得你在摸索一下退火温度的条件吧!...

用LA 可以扩出来,做了退火温度梯度还是没有什么成效,真是奇怪的很
22楼2012-07-03 15:08:33
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sd3824289

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-04 13:48:50
高保真酶虽然错配率很低,但是他的效率不高,我也遇到过这个问题,建议楼主用普通Taq酶和高保真酶混合使用,这样效果会比较些!个人建议!
坚持,就像流星,即使知道最后的结果,也要勇敢的走到最后!
23楼2012-07-03 15:41:39
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kaikal

银虫 (小有名气)

引用回帖:
22楼: Originally posted by anoldhorse at 2012-07-03 15:08:33
用LA 可以扩出来,做了退火温度梯度还是没有什么成效,真是奇怪的很...

那你看看的KOD酶会不会有问题啊!还有就是镁离子浓度在摸索一下!
加油!!!
24楼2012-07-04 07:16:12
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gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-07-04 13:49:06
我之前做PCR也碰到过相似的问题。最后发现是酶的问题。
开始是1min 1kb,后来换了5s 1kb的就P不出来的。酶的速度太快对稍微长一点基因片段要求就会很高。
所以还是用回原来的酶吧,时间少了,可是P不出来那也是没有用的啊~
25楼2012-07-04 10:57:11
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biobiobio

新虫 (初入文坛)


【答案】应助回帖

首先LA是普通taq酶,不要再当作高保真酶使用了,如果你有高保真的要求的话,用它不突变就怪了,KOD是高保真酶,扩增能力本来就会比普通Taq低,所 以你这种情况也就没什么奇怪了,你可以再试试其他高保真,phanta 猛药,兼具高保真和很强的扩增能力,速度很快,还有phusion也不错,都可以尝试
26楼2012-11-26 21:46:23
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

引用回帖:
8楼: Originally posted by 黄玉红 at 2012-07-02 02:44:04
我用PFU也扩不出来,目的片段大约2700bp,延伸5min,ITS引物也试了,也扩不出来,我的模板nanodrop检测都是正常的,不知道什么原因,有虫友帮忙分析一下吗

pfu按照说明书操作就行了,模板引物没有问题,还是扩不出来找厂家帮忙。。。
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
27楼2015-07-22 16:30:52
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