应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助，换了高保真酶扩不出来目的条带
53/1返回列表
查看: 4584  |  回复: 26
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

anoldhorse

铁虫 (初入文坛)

[求助] 求助，换了高保真酶扩不出来目的条带

我的目的产物是3600bp，原来用takara的LA HS可以扩出来，换了东洋纺的KOD Plus Neo怎么也扩不出来，求高手指点
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼2012-07-01 14:48:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biobiobio

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

首先LA是普通taq酶，不要再当作高保真酶使用了，如果你有高保真的要求的话，用它不突变就怪了，KOD是高保真酶，扩增能力本来就会比普通Taq低，所 以你这种情况也就没什么奇怪了，你可以再试试其他高保真，phanta 猛药，兼具高保真和很强的扩增能力，速度很快，还有phusion也不错，都可以尝试
赞一下 回复此楼
26楼2012-11-26 21:46:23
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 27 个回答

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, MolEPI+1, 鼓励发帖交流！ 2012-07-01 17:47:27
延伸时间要延长，你这两种酶我都没用过，但是一般情况下Taq之类的不保证酶1min最少可以延伸1000bp，pfu等高保真酶只有500~600bp，所以PCR条件也要相应的改变：
如果目的产物3600bp
用普通Taq酶延伸时间至少需要4min左右
用pfu高保真则需要8min左右
希望可以帮到你，祝楼主好运.
赞一下(1人) 回复此楼
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
2楼2012-07-01 15:24:48
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by Marado at 2012-07-01 15:24:48
延伸时间要延长，你这两种酶我都没用过，但是一般情况下Taq之类的不保证酶1min最少可以延伸1000bp，pfu等高保真酶只有500~600bp，所以PCR条件也要相应的改变：
如果目的产物3600bp
用普通Taq酶延伸时间至少需要4m ...

打错了几个字是Taq之类的不保真酶
赞一下 回复此楼
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
3楼2012-07-01 15:25:58
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anoldhorse

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Marado at 2012-07-01 15:24:48
延伸时间要延长，你这两种酶我都没用过，但是一般情况下Taq之类的不保证酶1min最少可以延伸1000bp，pfu等高保真酶只有500~600bp，所以PCR条件也要相应的改变：
如果目的产物3600bp
用普通Taq酶延伸时间至少需要4m ...

首先谢谢2楼，以前用的是4分钟，这个酶的说明书上写的是30秒1Kb，所以一开始用的是2分20秒，没出来，又加到4分钟，还是什么都没有
赞一下 回复此楼
4楼2012-07-01 15:52:40
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 27 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭