应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助，换了高保真酶扩不出来目的条带
272/3返回列表上一页123下一页
查看: 5305  |  回复: 26
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

lxlxyc

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
请问一下进行二次PCR了吗？ 如果条带太弱可以进行一下二次PCR
赞一下 回复此楼
11楼2012-07-02 09:20:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kaikal

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得2楼说的时间好像有点过长啊！一般pfu高保真酶比taq是要慢点，但是速度没这么慢啊！我觉得时间控制在4-5分钟左右应该差不多，我觉得楼主扩不出来应该不完全是延伸时间的问题，是不是应该做个延伸温度的梯度试一下，换酶之后有的时候温度会有2-3度的变化的吧！不行的话我觉得你应该用普通酶做个对照，相同的条件下看看普通酶能不能扩增出来！
祝楼主实验顺利啊！
赞一下 回复此楼
加油！！！
12楼2012-07-02 14:15:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anoldhorse

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by yuzhiming at 2012-07-02 09:03:53
我的原则是，首先要P出来，然后再保证序列正确，P不出来，再高保真都是浮云。...

精辟！~哈哈
回复此楼
13楼2012-07-02 15:50:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anoldhorse

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by lxlxyc at 2012-07-02 09:20:46
请问一下进行二次PCR了吗？ 如果条带太弱可以进行一下二次PCR

现在是P不出来条带，没得做二次PCR呵呵~
赞一下 回复此楼
14楼2012-07-02 15:51:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anoldhorse

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by kaikal at 2012-07-02 14:15:17
我觉得2楼说的时间好像有点过长啊！一般pfu高保真酶比taq是要慢点，但是速度没这么慢啊！我觉得时间控制在4-5分钟左右应该差不多，我觉得楼主扩不出来应该不完全是延伸时间的问题，是不是应该做个延伸温度的梯度试一 ...

谢谢哈~以前用takara的LA HS 是可以出来的，现在一点都没啦
赞一下 回复此楼
15楼2012-07-02 15:52:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangquanju

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by anoldhorse at 2012-07-02 08:47:07
是的，什么都没有，我也很奇怪，我原来用的退火温度就很低了，是51度，当时做的时候就没有再改退火温度，延伸我也是用的68度。...

我也用KOD plus扩过，我的引物退货温度不是很好，相差比较大，一个60，一个40，我设置的梯度在35到50之间，都扩增出来了，在高一点就可以！还有就是引物的浓度，一定不要太高了
赞一下 回复此楼
16楼2012-07-03 00:47:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kaikal

银虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by anoldhorse at 2012-07-02 15:52:54
谢谢哈~以前用takara的LA HS 是可以出来的，现在一点都没啦 ...

实际上你应该做一下对照，看看是酶的问题还是其他条件需要变动一下，你之前用TAKARA扩出来过，不代表你每次都能扩出来啊！
赞一下 回复此楼
加油！！！
17楼2012-07-03 08:56:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
换takara的LA taq或者EX Taq都是高保真的
赞一下 回复此楼
仕不可不弘毅，任重而道远
18楼2012-07-03 09:33:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Jane_618

银虫 (初入文坛)
顶顶顶顶顶~~~~~~~~~~~~
赞一下 回复此楼
19楼2012-07-03 09:49:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anoldhorse

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
17楼: Originally posted by kaikal at 2012-07-03 08:56:17
实际上你应该做一下对照，看看是酶的问题还是其他条件需要变动一下，你之前用TAKARA扩出来过，不代表你每次都能扩出来啊！...

酶的问题我也怀疑过，持家基因可以P出来，酶应该没有问题，呵呵
赞一下 回复此楼
20楼2012-07-03 09:50:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 anoldhorse 的主题更新
272/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:54 by yCO1Ll7aHtsw
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:47 by yCO1Ll7aHtsw
[博后之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 16:30 by etmYJ6d2rquH
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 16:03 by etmYJ6d2rquH
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 4/200 2026-09-29 15:15 by etmYJ6d2rquH
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 15:04 by etmYJ6d2rquH
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 6/300 2026-09-29 14:41 by etmYJ6d2rquH
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:30 by etmYJ6d2rquH
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:24 by etmYJ6d2rquH
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 3/150 2026-09-29 13:56 by etmYJ6d2rquH
[教师之家] 某top大学教授说“能够在市场中兑现的能力才是真能力”无比同意！ +8 zju2000 2026-09-26 9/450 2026-09-29 13:47 by ahsoarli
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 09:59 by JzYBbHIXWSrW
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:28 by ZvyPK8n6Nfki
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:46 by b8fCuTHqckEt
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[有机交流] 同一个分子，一条来自文献，一条来自AI——不告诉你答案，你会选哪条？ +3 tianxiaoxian 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:44 by tianxiaoxian
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 3/150 2026-09-28 22:21 by ez6fGg9abYaj
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:15 by ez6fGg9abYaj
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 3/150 2026-09-28 19:08 by 9lS3ad5oOymn
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 18:51 by 9lS3ad5oOymn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭