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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助、质粒酶切没有条带？
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wwdxx2004

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】求助、质粒酶切没有条带？

质粒跑胶有条带，质粒单酶切后却没有条带，呈弥散状，胶应该没有问题，酶也没有问题，费解？那个步骤能被污染呢，
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1楼 2010-11-07 10:05:07
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j2

木虫 (正式写手)
★
wwdxx2004(金币+1): 2010-11-07 14:59:31
scelab(金币+1):谢谢交流！:tiger06: 2010-11-08 23:06:57
第二孔是marker吗？怎么后几条带这么亮？
酶切量是多少，会不会量低了看不出来
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
2楼2010-11-07 11:09:41
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wwdxx2004

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by j2 at 2010-11-07 11:09:41:
第二孔是marker吗？怎么后几条带这么亮？
酶切量是多少，会不会量低了看不出来

第二孔为marker,后几条带比较亮可能由于跑的时间比较短，没有分开，
7ul质粒拿去酶切的，20ul的体系，跑胶上样为10ul
结果就成这样了，不知道为什么？
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3楼2010-11-07 14:59:23
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wwdxx2004

金虫 (正式写手)
★ ★
scelab(金币+2):谢谢交流！:tiger06: 2010-11-08 23:07:05
个人认为酶切过程没有问题，因为切其他的质粒没有问题，难道是提取质粒过程污染，提取质粒用的试剂盒，以前也没有什么问题的，现在怎么会这样呢，实在费解是那个步骤污染了，期待高手指点！
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4楼2010-11-07 20:44:54
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
wwdxx2004(金币+1): 2010-11-08 17:34:23
酶切弥散，一般都是质粒没提好的原因。建议换新试剂盒，或好点的试剂盒。
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Thank-you，so-blue.
5楼2010-11-08 16:18:04
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
wwdxx2004(金币+1): 2010-11-08 17:36:04
应该是质粒本身的问题，查一下质粒的性质，看在那种细胞里能稳定扩增
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
6楼2010-11-08 17:26:06
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wwdxx2004

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-11-08 16:18:04:
酶切弥散，一般都是质粒没提好的原因。建议换新试剂盒，或好点的试剂盒。

质粒没有提好会有哪些注意的地方呢，谢谢
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7楼2010-11-08 17:35:57
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wwdxx2004

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2010-11-08 17:26:06:
应该是质粒本身的问题，查一下质粒的性质，看在那种细胞里能稳定扩增

有这个可能，质粒是低拷贝的，提取质粒时菌液较稀，质粒跑胶带也较弱，可是酶切也不至于都没有条带啊
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8楼2010-11-08 17:37:51
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灵风心雨

木虫 (著名写手)
wwdxx2004(金币+1): 2010-11-08 19:18:34
应该是质粒本身的问题
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9楼2010-11-08 18:48:11
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
引用回帖:
Originally posted by wwdxx2004 at 2010-11-08 17:35:57:

质粒没有提好会有哪些注意的地方呢，谢谢

这个，找个提得好的人手把手教一次试试。
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Thank-you，so-blue.
10楼2010-11-08 21:18:08
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