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wwdxx2004

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】求助、质粒酶切没有条带?

质粒跑胶有条带,质粒单酶切后却没有条带,呈弥散状,胶应该没有问题,酶也没有问题,费解?那个步骤能被污染呢,
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j2

木虫 (正式写手)


wwdxx2004(金币+1): 2010-11-07 14:59:31
scelab(金币+1):谢谢交流!:tiger06: 2010-11-08 23:06:57
第二孔是marker吗?怎么后几条带这么亮?
酶切量是多少,会不会量低了看不出来
修炼ing,当虫仙……
2楼2010-11-07 11:09:41
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wwdxx2004

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by j2 at 2010-11-07 11:09:41:
第二孔是marker吗?怎么后几条带这么亮?
酶切量是多少,会不会量低了看不出来

第二孔为marker,后几条带比较亮可能由于跑的时间比较短,没有分开,
7ul质粒拿去酶切的,20ul的体系,跑胶上样为10ul
结果就成这样了,不知道为什么?
3楼2010-11-07 14:59:23
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wwdxx2004

金虫 (正式写手)

★ ★
scelab(金币+2):谢谢交流!:tiger06: 2010-11-08 23:07:05
个人认为酶切过程没有问题,因为切其他的质粒没有问题,难道是提取质粒过程污染,提取质粒用的试剂盒,以前也没有什么问题的,现在怎么会这样呢,实在费解是那个步骤污染了,期待高手指点!
4楼2010-11-07 20:44:54
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

wwdxx2004(金币+1): 2010-11-08 17:34:23
酶切弥散,一般都是质粒没提好的原因。建议换新试剂盒,或好点的试剂盒。
Thank-you,so-blue.
5楼2010-11-08 16:18:04
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

wwdxx2004(金币+1): 2010-11-08 17:36:04
应该是质粒本身的问题,查一下质粒的性质,看在那种细胞里能稳定扩增
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
6楼2010-11-08 17:26:06
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wwdxx2004

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-11-08 16:18:04:
酶切弥散,一般都是质粒没提好的原因。建议换新试剂盒,或好点的试剂盒。

质粒没有提好会有哪些注意的地方呢,谢谢
7楼2010-11-08 17:35:57
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wwdxx2004

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2010-11-08 17:26:06:
应该是质粒本身的问题,查一下质粒的性质,看在那种细胞里能稳定扩增

有这个可能,质粒是低拷贝的,提取质粒时菌液较稀,质粒跑胶带也较弱,可是酶切也不至于都没有条带啊
8楼2010-11-08 17:37:51
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灵风心雨

木虫 (著名写手)

wwdxx2004(金币+1): 2010-11-08 19:18:34
应该是质粒本身的问题
9楼2010-11-08 18:48:11
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

引用回帖:
Originally posted by wwdxx2004 at 2010-11-08 17:35:57:

质粒没有提好会有哪些注意的地方呢,谢谢

这个,找个提得好的人手把手教一次试试。
Thank-you,so-blue.
10楼2010-11-08 21:18:08
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