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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助、质粒酶切没有条带？
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tian1203

银虫 (著名写手)
wwdxx2004(金币+1):谢谢，我的那个不是切不开，一切就呈图片上那种弥散状了，我觉得是质粒提取中的问题，质粒被污染了 2010-11-09 14:21:38
最近做双酶切也是切不下来，后来明白是质粒的问题，质粒浓度不够，有可能切开了，片段太淡看不出来。个人建议，把菌液要浑，同时多加几毫升。祝好运！
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别紧张，我不是什么好人...
11楼2010-11-09 09:53:19
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keyanhrc

新虫 (小有名气)
wwdxx2004(金币+1):谢谢，质粒酶切前跑胶没有问题，一切就呈弥散状了，怀疑质粒被污染 2010-11-09 14:24:33
酶切前跑一下质粒，确定质粒没问题，再做酶切。
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12楼2010-11-09 10:42:43
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seeker91

木虫 (文坛精英)
知道质粒上有几个酶切位点吗？若只有一个位点，可能没有条带，就是你胶的情况。
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13楼2010-11-09 11:11:32
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seeker91

木虫 (文坛精英)
wwdxx2004(金币+1):质粒浓度不大，但是跑胶还是可以看见条带的，但是酶切就呈弥散状了，怀疑质粒污染 2010-11-09 14:26:41
引用回帖:
Originally posted by wwdxx2004 at 2010-11-07 14:59:23:


第二孔为marker,后几条带比较亮可能由于跑的时间比较短，没有分开，
7ul质粒拿去酶切的，20ul的体系，跑胶上样为10ul
结果就成这样了，不知道为什么？

7ul质粒浓度多大？
建议你单独跑一个质粒看看Marker为标，结果会很让你意外的。
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14楼2010-11-09 11:14:59
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seeker91

木虫 (文坛精英)
wwdxx2004(金币+1): 2010-11-09 14:23:33
引用回帖:
Originally posted by seeker91 at 2010-11-09 11:14:59:

7ul质粒浓度多大？
建议你单独跑一个质粒看看Marker为标，结果会很让你意外的。

哦，错了，是单酶切位点的质粒的酶切物和质粒共同跑胶比对。
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15楼2010-11-09 11:18:43
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竹林细雨

金虫 (著名写手)
★
wwdxx2004(金币+1): 2010-11-10 08:27:56
dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-11-10 10:21:19
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-11-08 16:18:04:
酶切弥散，一般都是质粒没提好的原因。建议换新试剂盒，或好点的试剂盒。

就是这个原因。从你的没有酶切的质粒看出来，你的质粒提的质量和纯度都不行，换个试剂盒或者自己配个buffer123都可以提的很好，祝你好运！
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16楼2010-11-09 16:02:16
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★
dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-11-10 10:21:28
wwdxx2004(金币+1): 2010-11-11 08:47:48
引用回帖:
Originally posted by wwdxx2004 at 2010-11-08 17:37:51:

有这个可能，质粒是低拷贝的，提取质粒时菌液较稀，质粒跑胶带也较弱，可是酶切也不至于都没有条带啊

能传个质粒提完后的图片上来吗？如果你的质粒中有基因组污染，再加上你的质粒本身浓度就很低，就会导致没切后没条带，一般是弥散的。
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
17楼2010-11-10 10:07:30
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wwdxx2004

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2010-11-10 10:07:30:


能传个质粒提完后的图片上来吗？如果你的质粒中有基因组污染，再加上你的质粒本身浓度就很低，就会导致没切后没条带，一般是弥散的。

第一泳道为提取的质粒，2泳道为marker，3、4、5泳道为酶切后的，质粒是一万多的，费解。
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18楼2010-11-11 09:02:44
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
wwdxx2004(金币+1): 2010-11-11 21:15:56
引用回帖:
Originally posted by wwdxx2004 at 2010-11-11 09:02:44:

第一泳道为提取的质粒，2泳道为marker，3、4、5泳道为酶切后的，质粒是一万多的，费解。

你的质粒是四条带，我觉得最上面一条带可能是基因组污染，但不是那么严重。你换个其他的酶（酶切位点单一的）切一下看看大小对不
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
19楼2010-11-11 15:37:05
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