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tian1203

银虫 (著名写手)

wwdxx2004(金币+1):谢谢,我的那个不是切不开,一切就呈图片上那种弥散状了,我觉得是质粒提取中的问题,质粒被污染了 2010-11-09 14:21:38
最近做双酶切也是切不下来,后来明白是质粒的问题,质粒浓度不够,有可能切开了,片段太淡看不出来。个人建议,把菌液要浑,同时多加几毫升。祝好运!
别紧张,我不是什么好人...
11楼2010-11-09 09:53:19
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keyanhrc

新虫 (小有名气)

wwdxx2004(金币+1):谢谢,质粒酶切前跑胶没有问题,一切就呈弥散状了,怀疑质粒被污染 2010-11-09 14:24:33
酶切前跑一下质粒,确定质粒没问题,再做酶切。
12楼2010-11-09 10:42:43
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seeker91

木虫 (文坛精英)


知道质粒上有几个酶切位点吗?若只有一个位点,可能没有条带,就是你胶的情况。
13楼2010-11-09 11:11:32
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seeker91

木虫 (文坛精英)


wwdxx2004(金币+1):质粒浓度不大,但是跑胶还是可以看见条带的,但是酶切就呈弥散状了,怀疑质粒污染 2010-11-09 14:26:41
引用回帖:
Originally posted by wwdxx2004 at 2010-11-07 14:59:23:


第二孔为marker,后几条带比较亮可能由于跑的时间比较短,没有分开,
7ul质粒拿去酶切的,20ul的体系,跑胶上样为10ul
结果就成这样了,不知道为什么?

7ul质粒浓度多大?
建议你单独跑一个质粒看看Marker为标,结果会很让你意外的。
14楼2010-11-09 11:14:59
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seeker91

木虫 (文坛精英)


wwdxx2004(金币+1): 2010-11-09 14:23:33
引用回帖:
Originally posted by seeker91 at 2010-11-09 11:14:59:

7ul质粒浓度多大?
建议你单独跑一个质粒看看Marker为标,结果会很让你意外的。

哦,错了,是单酶切位点的质粒的酶切物和质粒共同跑胶比对。
15楼2010-11-09 11:18:43
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竹林细雨

金虫 (著名写手)


wwdxx2004(金币+1): 2010-11-10 08:27:56
dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-11-10 10:21:19
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-11-08 16:18:04:
酶切弥散,一般都是质粒没提好的原因。建议换新试剂盒,或好点的试剂盒。

就是这个原因。从你的没有酶切的质粒看出来,你的质粒提的质量和纯度都不行,换个试剂盒或者自己配个buffer123都可以提的很好,祝你好运!
16楼2010-11-09 16:02:16
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空谷幽风

金虫 (正式写手)


dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-11-10 10:21:28
wwdxx2004(金币+1): 2010-11-11 08:47:48
引用回帖:
Originally posted by wwdxx2004 at 2010-11-08 17:37:51:

有这个可能,质粒是低拷贝的,提取质粒时菌液较稀,质粒跑胶带也较弱,可是酶切也不至于都没有条带啊

能传个质粒提完后的图片上来吗?如果你的质粒中有基因组污染,再加上你的质粒本身浓度就很低,就会导致没切后没条带,一般是弥散的。
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
17楼2010-11-10 10:07:30
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wwdxx2004

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2010-11-10 10:07:30:


能传个质粒提完后的图片上来吗?如果你的质粒中有基因组污染,再加上你的质粒本身浓度就很低,就会导致没切后没条带,一般是弥散的。

第一泳道为提取的质粒,2泳道为marker,3、4、5泳道为酶切后的,质粒是一万多的,费解。
18楼2010-11-11 09:02:44
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

wwdxx2004(金币+1): 2010-11-11 21:15:56
引用回帖:
Originally posted by wwdxx2004 at 2010-11-11 09:02:44:

第一泳道为提取的质粒,2泳道为marker,3、4、5泳道为酶切后的,质粒是一万多的,费解。

你的质粒是四条带,我觉得最上面一条带可能是基因组污染,但不是那么严重。你换个其他的酶(酶切位点单一的)切一下看看大小对不
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
19楼2010-11-11 15:37:05
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