应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助、质粒酶切没有条带？
192/2返回列表上一页12
查看: 3007  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

tian1203

银虫 (著名写手)
wwdxx2004(金币+1):谢谢，我的那个不是切不开，一切就呈图片上那种弥散状了，我觉得是质粒提取中的问题，质粒被污染了 2010-11-09 14:21:38
最近做双酶切也是切不下来，后来明白是质粒的问题，质粒浓度不够，有可能切开了，片段太淡看不出来。个人建议，把菌液要浑，同时多加几毫升。祝好运！
赞一下 回复此楼
别紧张，我不是什么好人...
11楼2010-11-09 09:53:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

keyanhrc

新虫 (小有名气)
wwdxx2004(金币+1):谢谢，质粒酶切前跑胶没有问题，一切就呈弥散状了，怀疑质粒被污染 2010-11-09 14:24:33
酶切前跑一下质粒，确定质粒没问题，再做酶切。
赞一下 回复此楼
12楼2010-11-09 10:42:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seeker91

木虫 (文坛精英)
知道质粒上有几个酶切位点吗？若只有一个位点，可能没有条带，就是你胶的情况。
赞一下 回复此楼
13楼2010-11-09 11:11:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seeker91

木虫 (文坛精英)
wwdxx2004(金币+1):质粒浓度不大，但是跑胶还是可以看见条带的，但是酶切就呈弥散状了，怀疑质粒污染 2010-11-09 14:26:41
引用回帖:
Originally posted by wwdxx2004 at 2010-11-07 14:59:23:


第二孔为marker,后几条带比较亮可能由于跑的时间比较短，没有分开，
7ul质粒拿去酶切的，20ul的体系，跑胶上样为10ul
结果就成这样了，不知道为什么？

7ul质粒浓度多大？
建议你单独跑一个质粒看看Marker为标，结果会很让你意外的。
赞一下 回复此楼
14楼2010-11-09 11:14:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seeker91

木虫 (文坛精英)
wwdxx2004(金币+1): 2010-11-09 14:23:33
引用回帖:
Originally posted by seeker91 at 2010-11-09 11:14:59:

7ul质粒浓度多大？
建议你单独跑一个质粒看看Marker为标，结果会很让你意外的。

哦，错了，是单酶切位点的质粒的酶切物和质粒共同跑胶比对。
赞一下 回复此楼
15楼2010-11-09 11:18:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

竹林细雨

金虫 (著名写手)
★
wwdxx2004(金币+1): 2010-11-10 08:27:56
dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-11-10 10:21:19
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-11-08 16:18:04:
酶切弥散，一般都是质粒没提好的原因。建议换新试剂盒，或好点的试剂盒。

就是这个原因。从你的没有酶切的质粒看出来，你的质粒提的质量和纯度都不行，换个试剂盒或者自己配个buffer123都可以提的很好，祝你好运！
赞一下(1人) 回复此楼
16楼2010-11-09 16:02:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)
★
dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-11-10 10:21:28
wwdxx2004(金币+1): 2010-11-11 08:47:48
引用回帖:
Originally posted by wwdxx2004 at 2010-11-08 17:37:51:

有这个可能，质粒是低拷贝的，提取质粒时菌液较稀，质粒跑胶带也较弱，可是酶切也不至于都没有条带啊

能传个质粒提完后的图片上来吗？如果你的质粒中有基因组污染，再加上你的质粒本身浓度就很低，就会导致没切后没条带，一般是弥散的。
赞一下(1人) 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
17楼2010-11-10 10:07:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wwdxx2004

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2010-11-10 10:07:30:


能传个质粒提完后的图片上来吗？如果你的质粒中有基因组污染，再加上你的质粒本身浓度就很低，就会导致没切后没条带，一般是弥散的。

第一泳道为提取的质粒，2泳道为marker，3、4、5泳道为酶切后的，质粒是一万多的，费解。
赞一下 回复此楼
18楼2010-11-11 09:02:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)
wwdxx2004(金币+1): 2010-11-11 21:15:56
引用回帖:
Originally posted by wwdxx2004 at 2010-11-11 09:02:44:

第一泳道为提取的质粒，2泳道为marker，3、4、5泳道为酶切后的，质粒是一万多的，费解。

你的质粒是四条带，我觉得最上面一条带可能是基因组污染，但不是那么严重。你换个其他的酶（酶切位点单一的）切一下看看大小对不
赞一下 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
19楼2010-11-11 15:37:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wwdxx2004 的主题更新
192/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 听说今天filecode变了 +4 布布和一二 2026-08-06 7/350 2026-08-06 17:06 by wdc28
[基金申请] 基金中了 +3 laoda193707 2026-08-06 3/150 2026-08-06 16:52 by 且听虎啸
[基金申请] filecode +7 布布和一二 2026-08-06 10/500 2026-08-06 16:22 by janehuiminli
[基金申请] filecode +8 等待解的谜 2026-08-06 12/600 2026-08-06 16:11 by janehuiminli
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +4 Tide man 2026-08-06 5/250 2026-08-06 16:08 by janehuiminli
[有机交流] 一个有机合成实验室都需要哪些设备？ 50+3 kf2781974 2026-07-31 12/600 2026-08-06 15:11 by eddyin
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[教师之家] 咨询面上基金 +4 李长云 2026-07-31 7/350 2026-08-06 11:20 by 李长云
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +22 低垂的野花 2026-07-31 30/1500 2026-08-05 18:03 by 低垂的野花
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[论文投稿] 十年后又回来了，论文投稿求助 +3 哈哈114477 2026-08-01 3/150 2026-08-04 15:40 by tegsgjy20
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
[基金申请] 娱乐 +4 Tide man 2026-08-03 4/200 2026-08-04 11:51 by wgch518
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭