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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酶切后无任何条带是什么原因？
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bettyshan

木虫 (正式写手)

梦幻biobrick

[交流] 【求助/交流】酶切后无任何条带是什么原因？

我质粒跑胶，大小大概正确，然后做酶切验证。用一种酶切，可以产生两个片段。
我用NdeI酶切，4.5小时。酶切完后，跑胶，无任何条带。请大家帮我分析一下是什么原因？MARKER条带正常。
谢谢
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我们都是芸芸众生的小人物，相遇相知，都是幸福！
1楼 2010-09-25 18:35:34
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molecula

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
lstt09nk(金币+2):鼓励交流~~ 2010-09-25 22:36:13
bettyshan(金币+1):谢谢~~ 2010-10-08 14:53:42
我想说两句  
首先 请你阐述清楚问题到底是什么

你说的 能够切开成为两条带的酶是什么  怎么后面又成了Nde I
一点都看不懂什么意思

如果你说的是Nde I 能够切成两条带   但是实际上你切不出
那么原因有很多  质粒是否纯化 Buffer加入量和是否使用BSA都是问题
而且 有的酶酶活未必高
所以 你看看是不是考虑一下这些问题
首先 你要保证质粒的纯化
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2楼2010-09-25 20:00:42
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lansing617

新虫 (小有名气)
要是没有切开的话原来的条带是应该在的啊。。
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3楼2010-09-25 20:57:59
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qiangfeng

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
lstt09nk(金币+3):很全面~~呵呵~~ 2010-09-25 22:36:34
bettyshan(金币+1):谢谢交流 2010-10-08 14:54:02
首先，我想说在我们实验室里，质粒跑电泳从来不用点Marker,只看看有没有条带（一般是1-3条带）即可，然后用提取的质粒为模板做PCR鉴定目的基因。如果PCR鉴定正确可以再做酶切鉴定，
其次，关于酶切没有条带。不知到你是要做单酶切还是双酶切。我猜你可能是要做单酶切实验。酶切没有目的基因原因很多，比如你提取的质粒上是否连有目的基因；提取的质粒中是否有酶抑制剂；酶切试剂在使用时是否存在不当；酶切时间是否恰当（在本实验室，4摄氏度，1-2d;16摄氏度，20h左右；37摄氏度，3h（这个用的较少）左右）等。
最后提一个建议，你在陈述问题的时候尽量详细，把问题说清楚，以便于让人明白你做实验过程中遇到的问题，便于解答你的问题。
以上仅是个人观点，仅作参考！！！！！！！！！！
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顺势而行，问心无愧！
4楼2010-09-25 22:09:33
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aofeng860308

木虫 (正式写手)
问题都没有说清楚
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5楼2010-09-26 00:34:32
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zhixuec

木虫 (著名写手)
降解了~~~~
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酷爱の族
6楼2010-09-26 01:31:59
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zking5129

铁虫 (初入文坛)
有可能是你的质粒浓度低，加上酶切缓冲液之后，质粒相当于稀释了几倍，上样的时候还是按照以前的上样量，很容易看不出条带来。
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7楼2010-09-26 09:19:48
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rtli1672

金虫 (著名写手)
降解了吧？你的质粒是不是放置了很久？还有，有些菌里有一些酶可以迅速降解质粒，是不是提取质粒的时候没有除掉啊？
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8楼2010-09-26 09:55:31
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shan-sa

金虫 (正式写手)
嗯嗯，可以重新提取质粒，或者加大质粒的量看看
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9楼2010-09-26 10:00:47
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