应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 双酶切后目的条带下出现多个条带的原因
101/1返回列表
查看: 3134  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

changqingx

金虫 (小有名气)

[交流] 双酶切后目的条带下出现多个条带的原因 已有8人参与

如题，这几天双酶切后做胶回收，照相时看到目的片段下面有很多小的片段，不知道是什么原因。双酶切后不是只能看见两条带吗？我的不知道怎么出现了很多小片段。我用的是Fermentas公司的Sal I和BamH I。体系为30μL的：
质粒DNA          15μL
10×tango        6μL
BamH I              1μL
Sal I                   1μL
ddH2O               7μL
昨天又更改了下体系为20μL：
质粒DNA          14μL
10×tango        4μL
BamH I              1μL
Sal I                   1μL
我切的是载体质粒DNA，一个是9000多bp，一个是5000多bp。所以想请大家帮跟忙分析下我的到底哪里出错了，谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-07-03 12:20:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lang2010

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
酶切位点设计有问题吧？
赞一下(1人) 回复此楼
走自己的路让别人去说吧！
2楼2010-07-03 19:52:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tanxi125

银虫 (小有名气)
你质粒加好多啊！
回复此楼
什么都得靠自己！我现在深刻理解！
3楼2011-01-12 14:51:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

changqingx

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by tanxi125 at 2011-01-12 14:51:09:
你质粒加好多啊！

说明书上介绍的步骤就是这样多，除了酶切不完和出现星火性，质粒多的话还有什么不好的影响的吗？
赞一下 回复此楼
4楼2011-01-12 16:28:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zgb1982

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是不是你片段内部有这两个酶切位点？
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-01-12 17:18:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-12 19:34:39
质粒加的太多了吧   主要得看看你的酶切位点在质粒上的位置
赞一下(2人) 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
6楼2011-01-12 18:50:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sfb1020

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不止一个这两个酶切位点
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-01-12 20:48:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hemabaobao

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可能是星活性，质粒提取时乙醇一定要除尽，可能导致在其他相似位点切割
赞一下 回复此楼
狼无处不在
8楼2012-04-10 18:57:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

changqingx

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2452655楼: Originally posted by hemabaobao at 2012-04-10 18:57:14:
可能是星活性，质粒提取时乙醇一定要除尽，可能导致在其他相似位点切割

嗯，谢谢了！
回复此楼
9楼2012-04-11 08:49:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1296785943

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
LZ的跟我用的酶是一样的，厂家也是一样的……我也出现同样的问题。
我酶切的结果：从右至左，依次为maker、酶切1h、1.5h、2h、2.5h
酶切体系：
           质粒                     6 μl
           10*Buufer             1 μl
           bamH1                0.5 μl
           sal1                     0.5 μl
           ddH2O                   2 μl
不知LZ的问题解决没？可分享下吗？谢谢！

o我个人觉得可能是酶的活性问题！
双酶切后目的条带下出现多个条带的原因
2014021６酶切条件xiami.jpg
赞一下 回复此楼
10楼2014-03-13 11:09:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 changqingx 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学调剂 ，六级已过，有科研经历 +9 曦熙兮 2026-03-15 9/450 2026-03-18 10:23 by macy2011
[基金申请] 被我言中：新模板不强调格式了，假专家开始管格式了 +4 beefly 2026-03-14 4/200 2026-03-17 22:04 by 黄鸟于飞Chao
[考研] 085601专硕，总分342求调剂，地区不限 +4 share_joy 2026-03-16 4/200 2026-03-17 21:32 by hmn_wj
[考研] 301求调剂 +4 A_JiXing 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:32 by ruiyingmiao
[考研] 293求调剂 +6 世界首富 2026-03-11 6/300 2026-03-17 17:04 by ruiyingmiao
[考研] 一志愿苏州大学材料工程（085601）专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +6 大火山小火山 2026-03-16 8/400 2026-03-17 15:05 by 无懈可击111
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +6 薛云鹏 2026-03-15 6/300 2026-03-17 11:05 by 学员h26Tkc
[考研] 289求调剂 +6 步川酷紫123 2026-03-11 6/300 2026-03-17 10:23 by Sammy2
[考研] 285化工学硕求调剂（081700） +9 柴郡猫_ 2026-03-12 9/450 2026-03-17 10:18 by Sammy2
[考研] 278求调剂 +3 Yy7400 2026-03-13 3/150 2026-03-17 08:24 by laoshidan
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗？ 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-14 3/150 2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 材料与化工一志愿南昌大学327求调剂推荐 +7 Ncdx123456 2026-03-13 8/400 2026-03-16 12:15 by karry wen
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油！? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] 【0703化学调剂】-一志愿华中师范大学-六级475 +5 Becho359 2026-03-11 5/250 2026-03-14 11:35 by 哦哦123
[考研] 求材料调剂 085600英一数二总分302 前三科235 精通机器学习 一志愿哈工大 +4 林yaxin 2026-03-12 4/200 2026-03-13 22:04 by 星空星月
[考研] 295求调剂 +3 小匕仔汁 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:17 by vgtyfty
[考研] 085600材料与化工 309分请求调剂 +7 dtdxzxx 2026-03-12 8/400 2026-03-13 14:43 by jxchenghu
[考研] 材料301分求调剂 +5 Liyouyumairs 2026-03-12 5/250 2026-03-13 14:42 by JourneyLucky
[考研] 270求调剂 085600材料与化工专硕 +3 YXCT 2026-03-11 3/150 2026-03-13 10:13 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭