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changqingx

金虫 (小有名气)

[交流] 双酶切后目的条带下出现多个条带的原因 已有8人参与

如题,这几天双酶切后做胶回收,照相时看到目的片段下面有很多小的片段,不知道是什么原因。双酶切后不是只能看见两条带吗?我的不知道怎么出现了很多小片段。我用的是Fermentas公司的Sal I和BamH I。体系为30μL的:
质粒DNA          15μL
10×tango        6μL
BamH I              1μL
Sal I                   1μL
ddH2O               7μL
昨天又更改了下体系为20μL:
质粒DNA          14μL
10×tango        4μL
BamH I              1μL
Sal I                   1μL
我切的是载体质粒DNA,一个是9000多bp,一个是5000多bp。所以想请大家帮跟忙分析下我的到底哪里出错了,谢谢!
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lang2010

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
酶切位点设计有问题吧?
走自己的路让别人去说吧!
2楼2010-07-03 19:52:10
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tanxi125

银虫 (小有名气)

你质粒加好多啊!
什么都得靠自己!我现在深刻理解!
3楼2011-01-12 14:51:09
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changqingx

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by tanxi125 at 2011-01-12 14:51:09:
你质粒加好多啊!

说明书上介绍的步骤就是这样多,除了酶切不完和出现星火性,质粒多的话还有什么不好的影响的吗?
4楼2011-01-12 16:28:35
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zgb1982

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
是不是你片段内部有这两个酶切位点?
5楼2011-01-12 17:18:41
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-12 19:34:39
质粒加的太多了吧   主要得看看你的酶切位点在质粒上的位置
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
6楼2011-01-12 18:50:00
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sfb1020

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不止一个这两个酶切位点
7楼2011-01-12 20:48:54
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hemabaobao

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可能是星活性,质粒提取时乙醇一定要除尽,可能导致在其他相似位点切割
狼无处不在
8楼2012-04-10 18:57:14
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changqingx

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2452655楼: Originally posted by hemabaobao at 2012-04-10 18:57:14:
可能是星活性,质粒提取时乙醇一定要除尽,可能导致在其他相似位点切割

嗯,谢谢了!
9楼2012-04-11 08:49:39
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1296785943

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
LZ的跟我用的酶是一样的,厂家也是一样的……我也出现同样的问题。
我酶切的结果:从右至左,依次为maker、酶切1h、1.5h、2h、2.5h
酶切体系:
           质粒                     6 μl
           10*Buufer             1 μl
           bamH1                0.5 μl
           sal1                     0.5 μl
           ddH2O                   2 μl
不知LZ的问题解决没?可分享下吗?谢谢!

o我个人觉得可能是酶的活性问题!
双酶切后目的条带下出现多个条带的原因
20140216酶切条件xiami.jpg

10楼2014-03-13 11:09:10
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