应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 双酶切后目的条带下出现多个条带的原因
101/1返回列表
查看: 3705  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

changqingx

金虫 (小有名气)

[交流] 双酶切后目的条带下出现多个条带的原因 已有8人参与

如题，这几天双酶切后做胶回收，照相时看到目的片段下面有很多小的片段，不知道是什么原因。双酶切后不是只能看见两条带吗？我的不知道怎么出现了很多小片段。我用的是Fermentas公司的Sal I和BamH I。体系为30μL的：
质粒DNA          15μL
10×tango        6μL
BamH I              1μL
Sal I                   1μL
ddH2O               7μL
昨天又更改了下体系为20μL：
质粒DNA          14μL
10×tango        4μL
BamH I              1μL
Sal I                   1μL
我切的是载体质粒DNA，一个是9000多bp，一个是5000多bp。所以想请大家帮跟忙分析下我的到底哪里出错了，谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-07-03 12:20:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lang2010

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
酶切位点设计有问题吧？
赞一下(1人) 回复此楼
走自己的路让别人去说吧！
2楼2010-07-03 19:52:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tanxi125

银虫 (小有名气)
你质粒加好多啊！
回复此楼
什么都得靠自己！我现在深刻理解！
3楼2011-01-12 14:51:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

changqingx

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by tanxi125 at 2011-01-12 14:51:09:
你质粒加好多啊！

说明书上介绍的步骤就是这样多，除了酶切不完和出现星火性，质粒多的话还有什么不好的影响的吗？
赞一下 回复此楼
4楼2011-01-12 16:28:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zgb1982

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是不是你片段内部有这两个酶切位点？
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-01-12 17:18:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-12 19:34:39
质粒加的太多了吧   主要得看看你的酶切位点在质粒上的位置
赞一下(2人) 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
6楼2011-01-12 18:50:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sfb1020

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不止一个这两个酶切位点
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-01-12 20:48:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hemabaobao

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可能是星活性，质粒提取时乙醇一定要除尽，可能导致在其他相似位点切割
赞一下 回复此楼
狼无处不在
8楼2012-04-10 18:57:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

changqingx

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2452655楼: Originally posted by hemabaobao at 2012-04-10 18:57:14:
可能是星活性，质粒提取时乙醇一定要除尽，可能导致在其他相似位点切割

嗯，谢谢了！
回复此楼
9楼2012-04-11 08:49:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1296785943

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
LZ的跟我用的酶是一样的，厂家也是一样的……我也出现同样的问题。
我酶切的结果：从右至左，依次为maker、酶切1h、1.5h、2h、2.5h
酶切体系：
           质粒                     6 μl
           10*Buufer             1 μl
           bamH1                0.5 μl
           sal1                     0.5 μl
           ddH2O                   2 μl
不知LZ的问题解决没？可分享下吗？谢谢！

o我个人觉得可能是酶的活性问题！
双酶切后目的条带下出现多个条带的原因
2014021６酶切条件xiami.jpg
赞一下 回复此楼
10楼2014-03-13 11:09:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 changqingx 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +3 且听虎啸 2026-08-17 4/200 2026-08-17 22:31 by ccec101
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +36 医学老男孩 2026-08-13 85/4250 2026-08-17 21:23 by lcmdlut
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +5 angus9576 2026-08-17 9/450 2026-08-17 20:57 by ssxclkj
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +4 基诺咪客 2026-08-17 4/200 2026-08-17 16:10 by Vivilian
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +12 Ldrop2023 2026-08-13 15/750 2026-08-17 15:02 by 小豌豆_发芽
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭