24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 3264  |  回复: 9

changqingx

金虫 (小有名气)

[交流] 双酶切后目的条带下出现多个条带的原因 已有8人参与

如题,这几天双酶切后做胶回收,照相时看到目的片段下面有很多小的片段,不知道是什么原因。双酶切后不是只能看见两条带吗?我的不知道怎么出现了很多小片段。我用的是Fermentas公司的Sal I和BamH I。体系为30μL的:
质粒DNA          15μL
10×tango        6μL
BamH I              1μL
Sal I                   1μL
ddH2O               7μL
昨天又更改了下体系为20μL:
质粒DNA          14μL
10×tango        4μL
BamH I              1μL
Sal I                   1μL
我切的是载体质粒DNA,一个是9000多bp,一个是5000多bp。所以想请大家帮跟忙分析下我的到底哪里出错了,谢谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lang2010

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
酶切位点设计有问题吧?
走自己的路让别人去说吧!
2楼2010-07-03 19:52:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tanxi125

银虫 (小有名气)

你质粒加好多啊!
什么都得靠自己!我现在深刻理解!
3楼2011-01-12 14:51:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

changqingx

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by tanxi125 at 2011-01-12 14:51:09:
你质粒加好多啊!

说明书上介绍的步骤就是这样多,除了酶切不完和出现星火性,质粒多的话还有什么不好的影响的吗?
4楼2011-01-12 16:28:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zgb1982

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
是不是你片段内部有这两个酶切位点?
5楼2011-01-12 17:18:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-12 19:34:39
质粒加的太多了吧   主要得看看你的酶切位点在质粒上的位置
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
6楼2011-01-12 18:50:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sfb1020

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不止一个这两个酶切位点
7楼2011-01-12 20:48:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hemabaobao

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可能是星活性,质粒提取时乙醇一定要除尽,可能导致在其他相似位点切割
狼无处不在
8楼2012-04-10 18:57:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

changqingx

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2452655楼: Originally posted by hemabaobao at 2012-04-10 18:57:14:
可能是星活性,质粒提取时乙醇一定要除尽,可能导致在其他相似位点切割

嗯,谢谢了!
9楼2012-04-11 08:49:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1296785943

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
LZ的跟我用的酶是一样的,厂家也是一样的……我也出现同样的问题。
我酶切的结果:从右至左,依次为maker、酶切1h、1.5h、2h、2.5h
酶切体系:
           质粒                     6 μl
           10*Buufer             1 μl
           bamH1                0.5 μl
           sal1                     0.5 μl
           ddH2O                   2 μl
不知LZ的问题解决没?可分享下吗?谢谢!

o我个人觉得可能是酶的活性问题!
双酶切后目的条带下出现多个条带的原因
20140216酶切条件xiami.jpg

10楼2014-03-13 11:09:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 changqingx 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 312求调剂 +3 山河似你温柔 2026-04-22 3/150 2026-04-22 20:17 by 学员JpLReM
[考博] 华师大读博 +3 xq83 2026-04-22 5/250 2026-04-22 10:42 by xq83
[教师之家] 又一批高校组建人工智能学院 师资行吗 不是骗人吗 +5 yexuqing 2026-04-19 5/250 2026-04-22 10:01 by easeheart
[论文投稿] 急需审稿人!!! +3 陆小果画大饼 2026-04-21 3/150 2026-04-21 23:54 by jzy_123456
[考博] 申博/考博 +4 啃面包的小书虫 2026-04-17 8/400 2026-04-21 16:26 by 啃面包的小书虫
[考研] 085600材料与化工调剂 5+3 孜孜不倦2002 2026-04-19 6/300 2026-04-20 21:25 by babero
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀,最好在一个月之内的,研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 7/350 2026-04-20 15:45 by 豆豆7758
[考研] 337求调剂 +3 jyz04 2026-04-18 3/150 2026-04-20 12:24 by 研可安
[考博] 申博 +3 Xyyx. 2026-04-18 3/150 2026-04-20 10:44 by YuY66
[考博] 湖南大学刘巧玲课题组2026年第二批次博士研究生招生信息 +3 南风观火 2026-04-18 5/250 2026-04-20 10:13 by 南风观火
[考研] 求计算机方向调剂 +3 Toffee2 2026-04-16 6/300 2026-04-19 22:37 by ll叶
[考研] 294求调剂 +8 淡然654321 2026-04-17 9/450 2026-04-19 19:51 by Equinoxhua
[考研] 304求调剂 +8 castLight 2026-04-16 8/400 2026-04-19 17:14 by 中豫男
[考研] 求调剂 +10 小聂爱学习 2026-04-16 12/600 2026-04-19 16:51 by 中豫男
[考研] 求调剂 +6 苦命人。。。 2026-04-18 7/350 2026-04-19 16:27 by 中豫男
[考研] 接受任何调剂 +6 也就是栗子 2026-04-17 7/350 2026-04-18 17:20 by 涵竹刘
[考研] 收到复试调剂但是去不了 +8 小蜗牛* 2026-04-16 8/400 2026-04-18 11:15 by zixin2025
[考研] 260求调剂 +4 Zyt1314520.. 2026-04-17 5/250 2026-04-18 08:28 by babysonlkd
[有机交流] 二苯甲酮酸类衍生物 50+3 小白爱主人 2026-04-17 6/300 2026-04-17 18:47 by kf2781974
[考研] 322求调剂 +6 tekuzu 2026-04-17 6/300 2026-04-17 13:48 by Espannnnnol
信息提示
请填处理意见