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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 双酶切后目的条带下出现多个条带的原因
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changqingx

金虫 (小有名气)

[交流] 双酶切后目的条带下出现多个条带的原因 已有8人参与

如题，这几天双酶切后做胶回收，照相时看到目的片段下面有很多小的片段，不知道是什么原因。双酶切后不是只能看见两条带吗？我的不知道怎么出现了很多小片段。我用的是Fermentas公司的Sal I和BamH I。体系为30μL的：
质粒DNA          15μL
10×tango        6μL
BamH I              1μL
Sal I                   1μL
ddH2O               7μL
昨天又更改了下体系为20μL：
质粒DNA          14μL
10×tango        4μL
BamH I              1μL
Sal I                   1μL
我切的是载体质粒DNA，一个是9000多bp，一个是5000多bp。所以想请大家帮跟忙分析下我的到底哪里出错了，谢谢！
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1楼 2010-07-03 12:20:13
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lang2010

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
酶切位点设计有问题吧？
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走自己的路让别人去说吧！
2楼2010-07-03 19:52:10
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tanxi125

银虫 (小有名气)
你质粒加好多啊！
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什么都得靠自己！我现在深刻理解！
3楼2011-01-12 14:51:09
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changqingx

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by tanxi125 at 2011-01-12 14:51:09:
你质粒加好多啊！

说明书上介绍的步骤就是这样多，除了酶切不完和出现星火性，质粒多的话还有什么不好的影响的吗？
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4楼2011-01-12 16:28:35
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zgb1982

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是不是你片段内部有这两个酶切位点？
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5楼2011-01-12 17:18:41
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-12 19:34:39
质粒加的太多了吧   主要得看看你的酶切位点在质粒上的位置
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
6楼2011-01-12 18:50:00
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sfb1020

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不止一个这两个酶切位点
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7楼2011-01-12 20:48:54
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hemabaobao

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可能是星活性，质粒提取时乙醇一定要除尽，可能导致在其他相似位点切割
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狼无处不在
8楼2012-04-10 18:57:14
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changqingx

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2452655楼: Originally posted by hemabaobao at 2012-04-10 18:57:14:
可能是星活性，质粒提取时乙醇一定要除尽，可能导致在其他相似位点切割

嗯，谢谢了！
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9楼2012-04-11 08:49:39
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1296785943

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
LZ的跟我用的酶是一样的，厂家也是一样的……我也出现同样的问题。
我酶切的结果：从右至左，依次为maker、酶切1h、1.5h、2h、2.5h
酶切体系：
           质粒                     6 μl
           10*Buufer             1 μl
           bamH1                0.5 μl
           sal1                     0.5 μl
           ddH2O                   2 μl
不知LZ的问题解决没？可分享下吗？谢谢！

o我个人觉得可能是酶的活性问题！
双酶切后目的条带下出现多个条带的原因
2014021６酶切条件xiami.jpg
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10楼2014-03-13 11:09:10
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