应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双酶切没出现目的条带，呈弥散型，有图，求助。
81/1返回列表
查看: 3800  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

supere23

新虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切没出现目的条带，呈弥散型，有图，求助。

切了三个小时，用的是takara的酶，Bamh1和Ecor1，buffer同一个，Ecor1的相对活性比较低，只要40。



[ Last edited by supere23 on 2011-5-23 at 16:20 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-05-23 16:16:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liukgg

木虫 (小有名气)
酶切的是质粒还是PCR产物？切之前跑过电泳吗？如果切之前没有问题的话那就看一下胶有没有问题
赞一下 回复此楼
山水凤凰
2楼2011-05-23 16:26:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3, EPI+1): 鼓励应助 2011-05-23 20:21:23
supere23(金币+1): 是质粒 2011-05-23 20:49:49
肿么是弥散状的呢？米有一点条带呀。。。

你酶切之前是什么东东啊？质粒还是PCR产物呢？

你的描述也过于简单了吧？

赶紧完善。。。
赞一下(1人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-05-23 16:30:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

supere23

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by supere23 at 2011-05-23 16:16:06:
切了三个小时，用的是takara的酶，Bamh1和Ecor1，buffer同一个，Ecor1的相对活性比较低，只要40。



[ Last edited by supere23 on 2011-5-23 at 16:20 ]

是质粒。。质粒电泳跑出来的条带可以的。。没什么问题
赞一下 回复此楼
4楼2011-05-23 20:49:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
弥散状，还都在下面，看起来像是DNA降解了。
你怎么连Maker都不跑啊？这样都不知道是电泳的问题还是酶切的问题啊
还有，下次同时跑一个没有酶切的质粒作对照。如果没有切的质粒ok，切过的是这样，那就是酶切时降解了。如果连没有切的质粒也这样，那就是电泳过程中被降解了，可考虑更换电泳缓冲液。
赞一下 回复此楼
5楼2011-05-23 22:19:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)
这两个酶有星活性，尤其是Bamh1，你还双酶切，很容易切成这样！用NEB的Bamh1-HF倒是可以，或建议分开切吧，要不就用大体系（100ul），可能会好一些。
赞一下 回复此楼
生命不息，探索不止。
6楼2011-05-24 17:48:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

36894256

金虫 (小有名气)
你还是验证原始质粒吧 模板你跑跑 估计有问题啊 切东西出问题是有条带的啊  你那根本什么没有 从做吧
赞一下 回复此楼
7楼2011-05-24 18:14:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wiln1

金虫 (小有名气)
切得时间太长了，缩短点时间试试。
赞一下 回复此楼
8楼2011-05-25 07:36:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 supere23 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭