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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双酶切没出现目的条带，呈弥散型，有图，求助。
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supere23

新虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切没出现目的条带，呈弥散型，有图，求助。

切了三个小时，用的是takara的酶，Bamh1和Ecor1，buffer同一个，Ecor1的相对活性比较低，只要40。



[ Last edited by supere23 on 2011-5-23 at 16:20 ]
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1楼 2011-05-23 16:16:06
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liukgg

木虫 (小有名气)
酶切的是质粒还是PCR产物？切之前跑过电泳吗？如果切之前没有问题的话那就看一下胶有没有问题
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山水凤凰
2楼2011-05-23 16:26:09
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3, EPI+1): 鼓励应助 2011-05-23 20:21:23
supere23(金币+1): 是质粒 2011-05-23 20:49:49
肿么是弥散状的呢？米有一点条带呀。。。

你酶切之前是什么东东啊？质粒还是PCR产物呢？

你的描述也过于简单了吧？

赶紧完善。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-05-23 16:30:15
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supere23

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by supere23 at 2011-05-23 16:16:06:
切了三个小时，用的是takara的酶，Bamh1和Ecor1，buffer同一个，Ecor1的相对活性比较低，只要40。



[ Last edited by supere23 on 2011-5-23 at 16:20 ]

是质粒。。质粒电泳跑出来的条带可以的。。没什么问题
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4楼2011-05-23 20:49:26
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
弥散状，还都在下面，看起来像是DNA降解了。
你怎么连Maker都不跑啊？这样都不知道是电泳的问题还是酶切的问题啊
还有，下次同时跑一个没有酶切的质粒作对照。如果没有切的质粒ok，切过的是这样，那就是酶切时降解了。如果连没有切的质粒也这样，那就是电泳过程中被降解了，可考虑更换电泳缓冲液。
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5楼2011-05-23 22:19:49
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)
这两个酶有星活性，尤其是Bamh1，你还双酶切，很容易切成这样！用NEB的Bamh1-HF倒是可以，或建议分开切吧，要不就用大体系（100ul），可能会好一些。
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生命不息，探索不止。
6楼2011-05-24 17:48:24
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36894256

金虫 (小有名气)
你还是验证原始质粒吧 模板你跑跑 估计有问题啊 切东西出问题是有条带的啊  你那根本什么没有 从做吧
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7楼2011-05-24 18:14:01
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wiln1

金虫 (小有名气)
切得时间太长了，缩短点时间试试。
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8楼2011-05-25 07:36:00
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