24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1640  |  回复: 6

季北辰

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】关于双酶切 已有5人参与

做双酶切时,在选择所用酶时应该考虑哪些事项?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励发帖应助。 2011-04-16 19:42:04
引用回帖:
Originally posted by 季北辰 at 2011-04-16 14:05:35:
做双酶切时,在选择所用酶时应该考虑哪些事项?

问题太泛了。
最基本的是要切得靶标上有相应的酶切位点,呵呵~开个玩笑

质粒上的两个酶切位点不能离得太近,而且如果要同时酶切的话两种内切酶的缓冲液要一致。

另外,常用的内切酶组合文献上都有报道,lz可以参阅相关的文献。

祝实验顺利!

[ Last edited by zhaohq1209 on 2011-4-16 at 14:23 ]
我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
2楼2011-04-16 14:21:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2): 鼓励发帖应助。 2011-04-16 19:42:11
引用回帖:
Originally posted by 季北辰 at 2011-04-16 14:05:35:
做双酶切时,在选择所用酶时应该考虑哪些事项?

1。不要使用同尾酶
2.尽量不要使用酶切后都是平端的酶(否则你还要通过测序来确定正反向)
3.最好有公用buffer,且在此buffer里的活性是80%以上,最适温度相同
4.考虑到成本因素,尽量用常用的酶
5.尽量不要去买快切酶了,我试过fermentas的快切酶,效果比较差,而且他们自己都说他们的快切酶不纯,有核酸酶污染
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
3楼2011-04-16 16:26:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

季北辰

新虫 (初入文坛)

谢谢你们的帮助,小北感激不尽啊.....
4楼2011-05-13 10:28:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

疯狂修行者

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): Good! 2011-05-13 17:52:43
不同内切酶,不同公司产品都有所不同,如果做双酶切最好选用同一家公司的,因为同一公司会为双酶切准备公用buffer。各种离子浓度时影响酶切效率的关键之一。至于酶切时间,都是不同的,每个公司以及不同的没都有区别,你可以仔细看他们的产品说明书,一般是比较大的一本书上,上面都有,上面还有好多注意事项和例子什么的,讲的很详细。酶切时间和酶的加入量要根据具体情况调配。单酶切和双酶切即使酶相同,也是有区别的,因为双酶切换用了公用buffer,降低酶的效率,所以有时候要加大个别酶的加入量或延长反应时间,才能完全酶切好。祝你实验顺利!
戒骄戒躁,坦荡做人,平常心做事,享受生活之美!!
5楼2011-05-13 10:40:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

如来神掌

捐助贵宾 (著名写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+3): 言简意赅,good! 2011-05-13 17:53:41
共同的缓冲体系

后续试验需求
生活就像直播,没有彩排的机会,不可能从新来过!所以必须把握好现在的每一个瞬间!
6楼2011-05-13 17:23:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

catq

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5): 给个红包,谢谢回帖
别烦了,用生物信息学软件吧。
Double Digestion Designer
7楼2012-03-14 20:40:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 季北辰 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求助 +3 卡卡东88 2026-04-06 4/200 2026-04-06 15:28 by going home
[考研] 材料工程310专硕调剂 +14 捞捞我…. 2026-04-04 15/750 2026-04-06 14:18 by lqwchd
[考研] 290求调剂085701 +11 1314捧花 2026-04-02 11/550 2026-04-06 13:31 by zllcz
[考研] 求调剂 +8 张zic 2026-04-05 9/450 2026-04-06 13:03 by 猪会飞
[考研] 301求调剂 +7 细胞相关蛋白 2026-04-03 7/350 2026-04-06 11:47 by lijunpoly
[硕博家园] 0856材料化工求调剂,一志愿211,初试成绩349 +3 江淮北月 2026-04-05 3/150 2026-04-05 20:31 by 啵啵啵0119
[考研] 308求调剂 +4 maverick^_^ 2026-04-03 4/200 2026-04-05 19:08 by 蓝云思雨
[考研] 工科求调剂 +15 11ggg 2026-04-03 15/750 2026-04-05 16:24 by zzx2138
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +4 崔wj 2026-04-04 5/250 2026-04-05 14:06 by imissbao
[考研] 085602调剂 初试总分335 +12 19123253302 2026-04-04 12/600 2026-04-05 08:08 by 544594351
[考研] 材料与化工306分找调剂 +12 沧海轻舟e 2026-04-03 13/650 2026-04-04 23:45 by lqwchd
[考研] 272求调剂 +4 松柏常青5 2026-04-03 4/200 2026-04-04 17:03 by babysonlkd
[考研] 305求调剂 +3 77Qi 2026-04-03 3/150 2026-04-03 23:01 by qzxyhcsy
[考研] 311求调剂 +11 勇敢的小吴 2026-04-02 11/550 2026-04-03 21:46 by qlm5820
[考研] 319求调剂 +18 太容易1018 2026-04-01 18/900 2026-04-03 11:18 by linyelide
[考研] 085600,320分求调剂 +6 大馋小子 2026-04-02 6/300 2026-04-02 21:54 by dongzh2009
[考研] 一志愿复旦材料,英一专硕,总分357调剂 +4 1050389037 2026-04-02 5/250 2026-04-02 21:40 by dongzh2009
[考研] 初试301,代码085701环境工程,本硕一致,四六级已过,有二区一作,共发表5篇论文 +6 axibli 2026-04-01 6/300 2026-04-02 13:42 by Ecowxq666!
[考研] 314求调剂 +11 1xiaojun23 2026-03-31 12/600 2026-04-02 12:31 by 1xiaojun23
[考研] 一志愿西交大080500材料学硕349 +6 jqx1258 2026-03-31 7/350 2026-03-31 21:08 by yuq
信息提示
请填处理意见