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季北辰

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】关于双酶切已有5人参与

做双酶切时,在选择所用酶时应该考虑哪些事项?
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励发帖应助。 2011-04-16 19:42:04
引用回帖:
Originally posted by 季北辰 at 2011-04-16 14:05:35:
做双酶切时,在选择所用酶时应该考虑哪些事项?

问题太泛了。
最基本的是要切得靶标上有相应的酶切位点,呵呵~开个玩笑

质粒上的两个酶切位点不能离得太近,而且如果要同时酶切的话两种内切酶的缓冲液要一致。

另外,常用的内切酶组合文献上都有报道,lz可以参阅相关的文献。

祝实验顺利!

[ Last edited by zhaohq1209 on 2011-4-16 at 14:23 ]
我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
2楼2011-04-16 14:21:39
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2): 鼓励发帖应助。 2011-04-16 19:42:11
引用回帖:
Originally posted by 季北辰 at 2011-04-16 14:05:35:
做双酶切时,在选择所用酶时应该考虑哪些事项?

1。不要使用同尾酶
2.尽量不要使用酶切后都是平端的酶(否则你还要通过测序来确定正反向)
3.最好有公用buffer,且在此buffer里的活性是80%以上,最适温度相同
4.考虑到成本因素,尽量用常用的酶
5.尽量不要去买快切酶了,我试过fermentas的快切酶,效果比较差,而且他们自己都说他们的快切酶不纯,有核酸酶污染
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
3楼2011-04-16 16:26:54
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季北辰

新虫 (初入文坛)

谢谢你们的帮助,小北感激不尽啊.....
4楼2011-05-13 10:28:00
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疯狂修行者

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): Good! 2011-05-13 17:52:43
不同内切酶,不同公司产品都有所不同,如果做双酶切最好选用同一家公司的,因为同一公司会为双酶切准备公用buffer。各种离子浓度时影响酶切效率的关键之一。至于酶切时间,都是不同的,每个公司以及不同的没都有区别,你可以仔细看他们的产品说明书,一般是比较大的一本书上,上面都有,上面还有好多注意事项和例子什么的,讲的很详细。酶切时间和酶的加入量要根据具体情况调配。单酶切和双酶切即使酶相同,也是有区别的,因为双酶切换用了公用buffer,降低酶的效率,所以有时候要加大个别酶的加入量或延长反应时间,才能完全酶切好。祝你实验顺利!
戒骄戒躁,坦荡做人,平常心做事,享受生活之美!!
5楼2011-05-13 10:40:49
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如来神掌

捐助贵宾 (著名写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+3): 言简意赅,good! 2011-05-13 17:53:41
共同的缓冲体系

后续试验需求
生活就像直播,没有彩排的机会,不可能从新来过!所以必须把握好现在的每一个瞬间!
6楼2011-05-13 17:23:43
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catq

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5): 给个红包,谢谢回帖
别烦了,用生物信息学软件吧。
Double Digestion Designer
7楼2012-03-14 20:40:47
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