应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于双酶切
71/1返回列表
查看: 1873  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

季北辰

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】关于双酶切 已有5人参与

做双酶切时，在选择所用酶时应该考虑哪些事项？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-04-16 14:05:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励发帖应助。 2011-04-16 19:42:04
引用回帖:
Originally posted by 季北辰 at 2011-04-16 14:05:35:
做双酶切时，在选择所用酶时应该考虑哪些事项？

问题太泛了。
最基本的是要切得靶标上有相应的酶切位点，呵呵~开个玩笑

质粒上的两个酶切位点不能离得太近，而且如果要同时酶切的话两种内切酶的缓冲液要一致。

另外，常用的内切酶组合文献上都有报道，lz可以参阅相关的文献。

祝实验顺利！

[ Last edited by zhaohq1209 on 2011-4-16 at 14:23 ]
赞一下(1人) 回复此楼
我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
2楼2011-04-16 14:21:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2): 鼓励发帖应助。 2011-04-16 19:42:11
引用回帖:
Originally posted by 季北辰 at 2011-04-16 14:05:35:
做双酶切时，在选择所用酶时应该考虑哪些事项？

1。不要使用同尾酶
2.尽量不要使用酶切后都是平端的酶（否则你还要通过测序来确定正反向）
3.最好有公用buffer，且在此buffer里的活性是80%以上，最适温度相同
4.考虑到成本因素，尽量用常用的酶
5.尽量不要去买快切酶了，我试过fermentas的快切酶，效果比较差，而且他们自己都说他们的快切酶不纯，有核酸酶污染
赞一下(2人) 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
3楼2011-04-16 16:26:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

季北辰

新虫 (初入文坛)
谢谢你们的帮助，小北感激不尽啊.....
赞一下 回复此楼
4楼2011-05-13 10:28:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

疯狂修行者

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): Good！ 2011-05-13 17:52:43
不同内切酶，不同公司产品都有所不同，如果做双酶切最好选用同一家公司的，因为同一公司会为双酶切准备公用buffer。各种离子浓度时影响酶切效率的关键之一。至于酶切时间，都是不同的，每个公司以及不同的没都有区别，你可以仔细看他们的产品说明书，一般是比较大的一本书上，上面都有，上面还有好多注意事项和例子什么的，讲的很详细。酶切时间和酶的加入量要根据具体情况调配。单酶切和双酶切即使酶相同，也是有区别的，因为双酶切换用了公用buffer，降低酶的效率，所以有时候要加大个别酶的加入量或延长反应时间，才能完全酶切好。祝你实验顺利！
赞一下(1人) 回复此楼
戒骄戒躁，坦荡做人，平常心做事，享受生活之美！！
5楼2011-05-13 10:40:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

如来神掌

捐助贵宾 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+3): 言简意赅，good！ 2011-05-13 17:53:41
共同的缓冲体系

后续试验需求
赞一下(2人) 回复此楼
生活就像直播,没有彩排的机会,不可能从新来过!所以必须把握好现在的每一个瞬间!
6楼2011-05-13 17:23:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

catq

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5): 给个红包，谢谢回帖
别烦了，用生物信息学软件吧。
Double Digestion Designer
赞一下 回复此楼
7楼2012-03-14 20:40:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 季北辰 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +15 爱看书的可乐 2026-08-26 17/850 2026-08-28 01:23 by xxniao123
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +9 Kittylucky 2026-08-27 9/450 2026-08-28 01:08 by jurkat.1640
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 04:33 by Ie9AyIAvGbvs
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 02:01 by Ie9AyIAvGbvs
[基金申请] 系统查不到 +10 董八千 2026-08-26 10/500 2026-08-26 16:30 by Equinoxhua
[基金申请] 怎么查啊 +5 huang1991js 2026-08-26 5/250 2026-08-26 16:09 by Equinoxhua
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭