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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于双酶切
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季北辰

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】关于双酶切 已有5人参与

做双酶切时，在选择所用酶时应该考虑哪些事项？
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1楼 2011-04-16 14:05:35
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2): 鼓励发帖应助。 2011-04-16 19:42:11
引用回帖:
Originally posted by 季北辰 at 2011-04-16 14:05:35:
做双酶切时，在选择所用酶时应该考虑哪些事项？

1。不要使用同尾酶
2.尽量不要使用酶切后都是平端的酶（否则你还要通过测序来确定正反向）
3.最好有公用buffer，且在此buffer里的活性是80%以上，最适温度相同
4.考虑到成本因素，尽量用常用的酶
5.尽量不要去买快切酶了，我试过fermentas的快切酶，效果比较差，而且他们自己都说他们的快切酶不纯，有核酸酶污染
赞一下(2人) 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
3楼2011-04-16 16:26:54
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查看全部 7 个回答

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励发帖应助。 2011-04-16 19:42:04
引用回帖:
Originally posted by 季北辰 at 2011-04-16 14:05:35:
做双酶切时，在选择所用酶时应该考虑哪些事项？

问题太泛了。
最基本的是要切得靶标上有相应的酶切位点，呵呵~开个玩笑

质粒上的两个酶切位点不能离得太近，而且如果要同时酶切的话两种内切酶的缓冲液要一致。

另外，常用的内切酶组合文献上都有报道，lz可以参阅相关的文献。

祝实验顺利！

[ Last edited by zhaohq1209 on 2011-4-16 at 14:23 ]
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
2楼2011-04-16 14:21:39
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季北辰

新虫 (初入文坛)
谢谢你们的帮助，小北感激不尽啊.....
赞一下 回复此楼
4楼2011-05-13 10:28:00
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疯狂修行者

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): Good！ 2011-05-13 17:52:43
不同内切酶，不同公司产品都有所不同，如果做双酶切最好选用同一家公司的，因为同一公司会为双酶切准备公用buffer。各种离子浓度时影响酶切效率的关键之一。至于酶切时间，都是不同的，每个公司以及不同的没都有区别，你可以仔细看他们的产品说明书，一般是比较大的一本书上，上面都有，上面还有好多注意事项和例子什么的，讲的很详细。酶切时间和酶的加入量要根据具体情况调配。单酶切和双酶切即使酶相同，也是有区别的，因为双酶切换用了公用buffer，降低酶的效率，所以有时候要加大个别酶的加入量或延长反应时间，才能完全酶切好。祝你实验顺利！
赞一下(1人) 回复此楼
戒骄戒躁，坦荡做人，平常心做事，享受生活之美！！
5楼2011-05-13 10:40:49
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