应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助：电泳后提取的DNA酶切后反而出现一更高分子量条带
61/1返回列表
查看: 1823  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

honglix

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】求助：电泳后提取的DNA酶切后反而出现一更高分子量条带 已有3人参与

求助：本人从琼脂糖中提取pIT质粒DNA，酶切前为一条3kb左右条带，在进行酶切后，反而出现一5.6kb左右条带，也在400bp左右有一条带。本人考虑为可能提取的DNA复性问题，酶切前的DNA上样孔内有荧光，请教高手解释原因，如何能避免该情况（已排除上样颠倒等情况）。不胜感谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-06-02 19:47:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ben1147

木虫 (正式写手)
honglix(金币+10):谢谢。但是为什么同上样量的DNA酶切后显色更明显，是EB插入线性的多么 2010-06-02 20:43:25
酶切前质粒是超螺旋的，当然比酶切后线性的跑得快啊，即使超螺旋分子量比线性的大，也不一定谁跑得快，构象不一样没法比较。单酶切片段的位置才能反应质粒的真实大小


只要酶切后大片段和小片段大小都正确就没事了


上样孔里的荧光可能是大分子量核酸，也可能是染胶液里的杂质
看之前用水冲一冲加样孔
赞一下 回复此楼
2楼2010-06-02 20:24:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cqyniu

金虫 (小有名气)
honglix(金币+5): 2010-06-02 20:51:10
你的那个质粒确定就是3kb吗？还是你跑电泳看的呢？质粒要进行单酶切跑电泳才能确定它的大小的。
赞一下 回复此楼
3楼2010-06-02 20:39:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

honglix

银虫 (正式写手)
我提取后跑电泳显示为3kb,未进行酶切，双酶切后显示一5.6kb和400bp,谢谢你们
赞一下 回复此楼
4楼2010-06-02 20:50:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-06-02 22:38:45
honglix(金币+5): 2010-06-08 04:17:51
honglix(金币+2): 2010-06-08 04:18:35
EB插入碱基之间，和DNA是线性还是环状没关系

亮度的差异可能是因为酶切之后条带比较细，DNA集中在一条细线上，显得亮。而超螺旋质粒条带有一定宽度，DNA分散在一个窄的区域里，显得暗
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-06-02 22:28:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cqyniu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by honglix at 2010-06-02 20:50:54:
我提取后跑电泳显示为3kb,未进行酶切，双酶切后显示一5.6kb和400bp,谢谢你们

那没有什么问题的。你可以做一个单酶切的试试
赞一下 回复此楼
6楼2010-06-03 08:38:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 honglix 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +15 爱看书的可乐 2026-08-26 17/850 2026-08-27 03:31 by xxniao123
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 系统查不到 +10 董八千 2026-08-26 10/500 2026-08-26 16:30 by Equinoxhua
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 科研孤儿太难了 +21 我4大白菜 2026-08-20 22/1100 2026-08-26 11:29 by nlgza
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +4 叶九微 2026-08-26 4/200 2026-08-26 10:52 by xiacongxu
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭