应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助：电泳后提取的DNA酶切后反而出现一更高分子量条带
61/1返回列表
查看: 1824  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

honglix

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】求助：电泳后提取的DNA酶切后反而出现一更高分子量条带 已有3人参与

求助：本人从琼脂糖中提取pIT质粒DNA，酶切前为一条3kb左右条带，在进行酶切后，反而出现一5.6kb左右条带，也在400bp左右有一条带。本人考虑为可能提取的DNA复性问题，酶切前的DNA上样孔内有荧光，请教高手解释原因，如何能避免该情况（已排除上样颠倒等情况）。不胜感谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-06-02 19:47:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ben1147

木虫 (正式写手)
honglix(金币+10):谢谢。但是为什么同上样量的DNA酶切后显色更明显，是EB插入线性的多么 2010-06-02 20:43:25
酶切前质粒是超螺旋的，当然比酶切后线性的跑得快啊，即使超螺旋分子量比线性的大，也不一定谁跑得快，构象不一样没法比较。单酶切片段的位置才能反应质粒的真实大小


只要酶切后大片段和小片段大小都正确就没事了


上样孔里的荧光可能是大分子量核酸，也可能是染胶液里的杂质
看之前用水冲一冲加样孔
赞一下 回复此楼
2楼2010-06-02 20:24:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cqyniu

金虫 (小有名气)
honglix(金币+5): 2010-06-02 20:51:10
你的那个质粒确定就是3kb吗？还是你跑电泳看的呢？质粒要进行单酶切跑电泳才能确定它的大小的。
赞一下 回复此楼
3楼2010-06-02 20:39:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

honglix

银虫 (正式写手)
我提取后跑电泳显示为3kb,未进行酶切，双酶切后显示一5.6kb和400bp,谢谢你们
赞一下 回复此楼
4楼2010-06-02 20:50:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-06-02 22:38:45
honglix(金币+5): 2010-06-08 04:17:51
honglix(金币+2): 2010-06-08 04:18:35
EB插入碱基之间，和DNA是线性还是环状没关系

亮度的差异可能是因为酶切之后条带比较细，DNA集中在一条细线上，显得亮。而超螺旋质粒条带有一定宽度，DNA分散在一个窄的区域里，显得暗
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-06-02 22:28:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cqyniu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by honglix at 2010-06-02 20:50:54:
我提取后跑电泳显示为3kb,未进行酶切，双酶切后显示一5.6kb和400bp,谢谢你们

那没有什么问题的。你可以做一个单酶切的试试
赞一下 回复此楼
6楼2010-06-03 08:38:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 honglix 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +15 爱看书的可乐 2026-08-26 17/850 2026-08-27 07:31 by xxniao123
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 04:33 by Ie9AyIAvGbvs
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 02:01 by Ie9AyIAvGbvs
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +3 a089 2026-08-26 3/150 2026-08-26 23:21 by young90
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 系统查不到 +10 董八千 2026-08-26 10/500 2026-08-26 16:30 by Equinoxhua
[基金申请] 怎么查啊 +5 huang1991js 2026-08-26 5/250 2026-08-26 16:09 by Equinoxhua
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +22 羊腰板 2026-08-21 25/1250 2026-08-26 15:00 by zuocuiping
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 22/1100 2026-08-25 15:36 by 医学老男孩
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭