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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶切以后没有条带
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他她0328

银虫 (小有名气)

[求助] 酶切以后没有条带

随机酶切后0.5%的琼脂糖凝胶电泳检测，一点条带都没有，请问是怎么回事？
酶切体系： gDNA      10微克
           10 × buffer       40微升
           酶            1 U
                   双蒸水     至 400微升
37℃水浴30min。
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1楼 2011-10-09 13:37:18
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
他她0328(金币+1): 2011-10-09 17:00:31
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-10-10 17:16:22
为什么要搞这么大的体系？还有你照胶时用EB染色没？再有就是可能切碎了，浓度又低，就看不出来了
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在等待中涅槃重生
2楼2011-10-09 13:51:31
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

这么大体系……可能是太稀了吧
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显微镜下的世界很精彩！
3楼2011-10-09 14:03:38
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amilie030312

金虫 (正式写手)
1U的酶你用400微升的体系，没搞懂要做啥
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4楼2011-10-09 14:33:08
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wzqno

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 问得好 2011-10-10 17:16:12
你确定酶只用一个单位？？而且体系是400微升，这个体系从哪借鉴的？？
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5楼2011-10-09 16:45:21
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他她0328

银虫 (小有名气)
wanhscn(金币+2): 热心！ 2011-10-15 23:10:41
wanhscn(金币-2): 2011-10-15 23:13:46
引用回帖:
1楼: Originally posted by 他她0328 at 2011-10-09 13:37:18:
随机酶切后0.5%的琼脂糖凝胶电泳检测，一点条带都没有，请问是怎么回事？
酶切体系： gDNA      10微克
           10 × buffer       40微升
           酶            1 U
                   双蒸水      ...

这是我的实验方案
1)配制酶切分析缓冲液：
gDNA   l0ug
Buffer  40ul
ddH2O到400ul
2)在冰上按以下制备反应体系
管号 体系
1. 40 u l酶切分析缓冲液+1 IU 酶
2. 20u l酶切分析缓冲液+20u l管1
3. 20u 1酶切分析缓冲液+20u l管2
……
10. 20u 1酶切分析缓冲液+20u l管9

这里做的是确定一下最佳酶量，然后再做酶切。
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6楼2011-10-09 17:06:24
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他她0328

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by amilie030312 at 2011-10-09 14:33:08:
1U的酶你用400微升的体系，没搞懂要做啥

这是我的实验方案
1)配制酶切分析缓冲液：
gDNA   l0ug
Buffer  40ul
ddH2O到400ul
2)在冰上按以下制备反应体系
管号 体系
1. 40 u l酶切分析缓冲液+1 IU 酶
2. 20u l酶切分析缓冲液+20u l管1
3. 20u 1酶切分析缓冲液+20u l管2
……
10. 20u 1酶切分析缓冲液+20u l管9

这里做的是确定一下最佳酶量，然后再做酶切。
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7楼2011-10-09 17:06:50
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他她0328

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by amilie030312 at 2011-10-09 14:33:08:
1U的酶你用400微升的体系，没搞懂要做啥

这是我的实验方案
1)配制酶切分析缓冲液：
gDNA   l0ug
Buffer  40ul
ddH2O到400ul
2)在冰上按以下制备反应体系
管号 体系
1. 40 u l酶切分析缓冲液+1 IU 酶
2. 20u l酶切分析缓冲液+20u l管1
3. 20u 1酶切分析缓冲液+20u l管2
……
10. 20u 1酶切分析缓冲液+20u l管9

这里做的是确定一下最佳酶量，然后再做酶切。
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8楼2011-10-09 17:07:02
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他她0328

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yuxia82012 at 2011-10-09 13:51:31:
为什么要搞这么大的体系？还有你照胶时用EB染色没？再有就是可能切碎了，浓度又低，就看不出来了

这是我的实验方案
1)配制酶切分析缓冲液：
gDNA   l0ug
Buffer  40ul
ddH2O到400ul
2)在冰上按以下制备反应体系
管号 体系
1. 40 u l酶切分析缓冲液+1 IU 酶
2. 20u l酶切分析缓冲液+20u l管1
3. 20u 1酶切分析缓冲液+20u l管2
……
10. 20u 1酶切分析缓冲液+20u l管9

这里做的是确定一下最佳酶量，然后再做酶切。
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9楼2011-10-09 17:16:39
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他她0328

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wzqno at 2011-10-09 16:45:21:
你确定酶只用一个单位？？而且体系是400微升，这个体系从哪借鉴的？？

这是我的实验方案
1)配制酶切分析缓冲液：
gDNA   l0ug
Buffer  40ul
ddH2O到400ul
2)在冰上按以下制备反应体系
管号 体系
1. 40 u l酶切分析缓冲液+1 IU 酶
2. 20u l酶切分析缓冲液+20u l管1
3. 20u 1酶切分析缓冲液+20u l管2
……
10. 20u 1酶切分析缓冲液+20u l管9

这里做的是确定一下最佳酶量，然后再做酶切。
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10楼2011-10-09 17:16:55
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