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gdongli8325

铁杆木虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】PCR产物酶切条带淡的原因

做了整板的PCR,检测后条带不亮,以前扩增很亮的样品,现在条带也比较淡。实在搞不懂哪里出了问题?虽然如此,我紧接着还是直接做了酶切,但跑胶检测,条带非常淡,根本看不清带型。所以,在此想问一下(1)如何提高PCR产物亮度?(2)如果提高酶切后PCR产物亮度?
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yqhc

金虫 (小有名气)


gdongli8325(金币+1): 2010-11-22 02:33:55
pcr有问题吧,目的gene应该很亮的
2楼2010-11-16 06:39:18
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zdmei

金虫 (小有名气)


以前扩增很亮,可能是模板的问题吧,是不是有降级
3楼2010-11-16 08:23:26
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zdmei

金虫 (小有名气)


gdongli8325(金币+1): 2010-11-22 02:34:02
模板有降解
4楼2010-11-16 08:24:02
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gdongli8325(金币+1): 2010-11-22 02:34:07
要提高酶切后pcr产物的亮度必须加大酶切底物的量,所以你要提高PCR产物的得率。既然你以前扩的比较亮那有可能模板降解,也有可能引物降解或是体系中其他的试剂有问题比如buffer使用时间太久了
5楼2010-11-16 08:51:21
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gdongli8325(金币+1): 2010-11-22 02:34:17
如果其他条件能保证都是一模一样的话
那问题就复杂了
模板降解;
引物降解;
还有酶失效。。。。

其实这些基本上都不太可能发生的,所以我觉得还是好好检查一下所有的东西是否加对了吧。
6楼2010-11-16 08:52:51
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