24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1475  |  回复: 5

gdongli8325

铁杆木虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】PCR产物酶切条带淡的原因

做了整板的PCR,检测后条带不亮,以前扩增很亮的样品,现在条带也比较淡。实在搞不懂哪里出了问题?虽然如此,我紧接着还是直接做了酶切,但跑胶检测,条带非常淡,根本看不清带型。所以,在此想问一下(1)如何提高PCR产物亮度?(2)如果提高酶切后PCR产物亮度?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yqhc

金虫 (小有名气)


gdongli8325(金币+1): 2010-11-22 02:33:55
pcr有问题吧,目的gene应该很亮的
2楼2010-11-16 06:39:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zdmei

金虫 (小有名气)


以前扩增很亮,可能是模板的问题吧,是不是有降级
3楼2010-11-16 08:23:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zdmei

金虫 (小有名气)


gdongli8325(金币+1): 2010-11-22 02:34:02
模板有降解
4楼2010-11-16 08:24:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
gdongli8325(金币+1): 2010-11-22 02:34:07
要提高酶切后pcr产物的亮度必须加大酶切底物的量,所以你要提高PCR产物的得率。既然你以前扩的比较亮那有可能模板降解,也有可能引物降解或是体系中其他的试剂有问题比如buffer使用时间太久了
5楼2010-11-16 08:51:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
gdongli8325(金币+1): 2010-11-22 02:34:17
如果其他条件能保证都是一模一样的话
那问题就复杂了
模板降解;
引物降解;
还有酶失效。。。。

其实这些基本上都不太可能发生的,所以我觉得还是好好检查一下所有的东西是否加对了吧。
6楼2010-11-16 08:52:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 gdongli8325 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 调剂 +8 卷卷卷心菜_ 2026-04-09 8/400 2026-04-09 22:16 by lbsjt
[考研] 材料专硕调剂 +16 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-07 17/850 2026-04-09 21:16 by wutongshun
[考研] 一志愿211 0703化学 346分求调剂 +19 土豆er? 2026-04-09 20/1000 2026-04-09 20:33 by maddjdld
[考研] 材料化工总分334求调剂 +16 Riot2025 2026-04-08 17/850 2026-04-09 20:19 by maddjdld
[考研] 289求调剂 +4 L1ttleTiger 2026-04-04 4/200 2026-04-09 19:53 by xiayizhi
[考研] 267求调剂 +5 再忙也要吃饭啊 2026-04-09 5/250 2026-04-09 18:47 by stone_128
[考研] 一志愿北京2,材料与化工308求调剂 +17 熊二想上岸 2026-04-04 18/900 2026-04-09 09:13 by leyan1127
[考研] 331求调剂 +5 luoxin0706. 2026-04-08 5/250 2026-04-08 22:15 by zhouyuwinner
[考研] 专硕0854初试考材科基,求调剂 +7 3220548044 2026-04-06 10/500 2026-04-08 21:59 by hypershenger
[考研] 调剂 +18 不逢春 2026-04-05 19/950 2026-04-07 22:04 by lijunpoly
[考研] 一志愿西电085401求调剂 +4 sunw1306 2026-04-07 4/200 2026-04-07 16:40 by 啵啵啵0119
[考研] 0854求调剂 +9 亨氏番茄沙司 2026-04-06 10/500 2026-04-07 14:37 by shdgaomin
[考研] 一志愿安徽某211 0703化学总分339求调剂 +7 晚风不晚 2026-04-04 7/350 2026-04-06 14:06 by houyaoxu
[考研] 0860 求调剂 一志愿国科大 348 分 +3 WiiiP 2026-04-03 3/150 2026-04-05 17:43 by Ecowxq666!
[考研] 311分 22408 求调剂 +3 bing_bot 2026-04-03 3/150 2026-04-05 00:43 by chongya
[考研] 材料383求调剂 +5 郭阳阳阳成 2026-04-04 5/250 2026-04-04 19:06 by dongzh2009
[考研] 266求调剂 +8 学员97LZgn 2026-04-03 8/400 2026-04-04 09:02 by 20021109
[考研] 357求调剂 +13 1050389037 2026-04-03 13/650 2026-04-03 22:27 by 无际的草原
[考研] 一志愿中国石油大学化学工程323分求调剂 +4 化工专硕323分 2026-04-03 6/300 2026-04-03 22:12 by dongzh2009
[考研] 求调剂机会 +5 意染ivy 2026-04-03 5/250 2026-04-03 15:13 by qoooooo614
信息提示
请填处理意见