应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR产物酶切条带淡的原因
61/1返回列表
查看: 1733  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

gdongli8325

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR产物酶切条带淡的原因

做了整板的PCR，检测后条带不亮，以前扩增很亮的样品，现在条带也比较淡。实在搞不懂哪里出了问题？虽然如此，我紧接着还是直接做了酶切，但跑胶检测，条带非常淡，根本看不清带型。所以，在此想问一下（1）如何提高PCR产物亮度？（2）如果提高酶切后PCR产物亮度？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-11-16 06:30:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yqhc

金虫 (小有名气)
gdongli8325(金币+1): 2010-11-22 02:33:55
pcr有问题吧，目的gene应该很亮的
赞一下 回复此楼
2楼2010-11-16 06:39:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zdmei

金虫 (小有名气)
以前扩增很亮，可能是模板的问题吧，是不是有降级
赞一下 回复此楼
3楼2010-11-16 08:23:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zdmei

金虫 (小有名气)
gdongli8325(金币+1): 2010-11-22 02:34:02
模板有降解
回复此楼
4楼2010-11-16 08:24:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)
gdongli8325(金币+1): 2010-11-22 02:34:07
要提高酶切后pcr产物的亮度必须加大酶切底物的量，所以你要提高PCR产物的得率。既然你以前扩的比较亮那有可能模板降解，也有可能引物降解或是体系中其他的试剂有问题比如buffer使用时间太久了
赞一下 回复此楼
5楼2010-11-16 08:51:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)
gdongli8325(金币+1): 2010-11-22 02:34:17
如果其他条件能保证都是一模一样的话
那问题就复杂了
模板降解；
引物降解；
还有酶失效。。。。

其实这些基本上都不太可能发生的，所以我觉得还是好好检查一下所有的东西是否加对了吧。
赞一下 回复此楼
6楼2010-11-16 08:52:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 gdongli8325 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭