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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR产物酶切条带淡的原因
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gdongli8325

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR产物酶切条带淡的原因

做了整板的PCR，检测后条带不亮，以前扩增很亮的样品，现在条带也比较淡。实在搞不懂哪里出了问题？虽然如此，我紧接着还是直接做了酶切，但跑胶检测，条带非常淡，根本看不清带型。所以，在此想问一下（1）如何提高PCR产物亮度？（2）如果提高酶切后PCR产物亮度？
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1楼 2010-11-16 06:30:04
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yqhc

金虫 (小有名气)
gdongli8325(金币+1): 2010-11-22 02:33:55
pcr有问题吧，目的gene应该很亮的
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2楼2010-11-16 06:39:18
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zdmei

金虫 (小有名气)
以前扩增很亮，可能是模板的问题吧，是不是有降级
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3楼2010-11-16 08:23:26
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zdmei

金虫 (小有名气)
gdongli8325(金币+1): 2010-11-22 02:34:02
模板有降解
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4楼2010-11-16 08:24:02
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
gdongli8325(金币+1): 2010-11-22 02:34:07
要提高酶切后pcr产物的亮度必须加大酶切底物的量，所以你要提高PCR产物的得率。既然你以前扩的比较亮那有可能模板降解，也有可能引物降解或是体系中其他的试剂有问题比如buffer使用时间太久了
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5楼2010-11-16 08:51:21
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)
gdongli8325(金币+1): 2010-11-22 02:34:17
如果其他条件能保证都是一模一样的话
那问题就复杂了
模板降解；
引物降解；
还有酶失效。。。。

其实这些基本上都不太可能发生的，所以我觉得还是好好检查一下所有的东西是否加对了吧。
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6楼2010-11-16 08:52:51
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