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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcr产物 MspI（Takara）酶切条带弥散 原因
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凌-强

银虫 (小有名气)

[求助] pcr产物 MspI（Takara）酶切条带弥散 原因

最近用MspI 酶切PCR产物，但是跑出来的条带在100bp处总是出现弥散条带，是向两边扩张那种，感到很奇怪，找不到原因？

ps：前期也用MspI酶切PCR产物，但是都挺好的，现在就突然出现这样的原因了，我什么都没有改变。求高手指点下原因，谢谢
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1楼 2011-07-12 09:45:34
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足下客

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): good 2011-07-12 19:31:09
我以前酶切之后跑胶出现过上下弥散很厉害的时候，向两边弥散还没有碰到过。
请问你酶切了多久？
有时候切太久，就容易弥散。
你用MspI酶切的片段与以前的片段是一个吗？
有些基因片段用某些酶切后不知道什么原因也容易发生弥散。
也可能是你的酶被污染了。
我一般都是换一个牌子的酶，或者是改变一下酶切体系，分子生物实验好多地方都无从找原因。
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2楼2011-07-12 12:54:27
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moron1123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wanhscn(金币+5): 鼓励新虫多发贴！鼓励多来分子生物版！ 2011-10-10 09:56:15
酶切体系一般按说明书来，酶切时间很关键，不要切太长时间。时间太长的话就容易出现弥散的现象。建议切2-3小时就行了。
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3楼2011-10-10 09:42:25
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junxiao0320

金虫 (小有名气)

学生

【答案】应助回帖

凌-强(金币+5): 2011-11-10 15:20:14
版主，酶切久了时是可能出现的，
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寻找方向，前进
4楼2011-10-23 08:02:41
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xiaoche

铜虫 (小有名气)
★ ★
西瓜(金币+2): 是滴 2011-10-26 23:25:15
嗯，切时间久了容易出现星活性，就如楼主的情况，会把别的位点也切开，然后出现了弥散的现象，
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5楼2011-10-26 21:23:42
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junxiao0320

金虫 (小有名气)

学生

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): Good 2011-11-06 21:49:18
100bp向来都是这样的，你可以看一下marker也是这样，小片段应该选择浓一点的胶
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寻找方向，前进
6楼2011-11-06 21:10:55
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