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凌-强

银虫 (小有名气)

[求助] pcr产物 MspI(Takara)酶切条带弥散 原因

最近用MspI 酶切PCR产物,但是跑出来的条带在100bp处总是出现弥散条带,是向两边扩张那种,感到很奇怪,找不到原因?

ps:前期也用MspI酶切PCR产物,但是都挺好的,现在就突然出现这样的原因了,我什么都没有改变。求高手指点下原因,谢谢
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足下客

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): good 2011-07-12 19:31:09
我以前酶切之后跑胶出现过上下弥散很厉害的时候,向两边弥散还没有碰到过。
请问你酶切了多久?
有时候切太久,就容易弥散。
你用MspI酶切的片段与以前的片段是一个吗?
有些基因片段用某些酶切后不知道什么原因也容易发生弥散。
也可能是你的酶被污染了。
我一般都是换一个牌子的酶,或者是改变一下酶切体系,分子生物实验好多地方都无从找原因。
2楼2011-07-12 12:54:27
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moron1123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wanhscn(金币+5): 鼓励新虫多发贴!鼓励多来分子生物版! 2011-10-10 09:56:15
酶切体系一般按说明书来,酶切时间很关键,不要切太长时间。时间太长的话就容易出现弥散的现象。建议切2-3小时就行了。
3楼2011-10-10 09:42:25
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junxiao0320

金虫 (小有名气)

学生

【答案】应助回帖

凌-强(金币+5): 2011-11-10 15:20:14
版主,酶切久了时是可能出现的,
寻找方向,前进
4楼2011-10-23 08:02:41
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xiaoche

铜虫 (小有名气)

★ ★
西瓜(金币+2): 是滴 2011-10-26 23:25:15
嗯,切时间久了容易出现星活性,就如楼主的情况,会把别的位点也切开,然后出现了弥散的现象,
5楼2011-10-26 21:23:42
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junxiao0320

金虫 (小有名气)

学生

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): Good 2011-11-06 21:49:18
100bp向来都是这样的,你可以看一下marker也是这样,小片段应该选择浓一点的胶
寻找方向,前进
6楼2011-11-06 21:10:55
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