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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】双酶切PCR产物的时间
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寒蕤

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】双酶切PCR产物的时间 已有7人参与

各位好！PCR产物用双酶切的时候，一般切多长时间比较合适呢？我用的是NEB公司的EcoR1和Xho1的酶。
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1楼 2011-04-14 21:20:30
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kuang_jie

铜虫 (初入文坛)
一般三四个小时就OK了
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2楼2011-04-15 09:58:32
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
最是温度下两个小时足够，请参考http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2311683
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
3楼2011-04-16 09:24:21
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
西瓜(金币+2): 欢迎交流 2011-10-04 11:10:48
引用回帖:
Originally posted by 寒蕤 at 2011-04-14 21:20:30:
各位好！PCR产物用双酶切的时候，一般切多长时间比较合适呢？我用的是NEB公司的EcoR1和Xho1的酶。

看他们两在共同Buffer里的酶切效率了，都能达到100%的话旧一起切，3-4小时差不多了，要是不放心的话就过夜吧
如果他们两在共同Buffer里的酶切效率不搞的话，建议分两次单酶切，第一次酶切后回收再用第二个酶切，不过损失较多，要多制备点
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4楼2011-04-16 10:45:01
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xujian568

至尊木虫 (著名写手)

Count XU
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
西瓜(金币+1): 鼓励交流~不过酶切PCR产物也是为了克隆到质粒里吧……您的意思是用其他酶切位点克隆到质粒里，再用原来的需要的位点酶切出来？ 2011-10-04 11:13:44
在不清楚的前提下，建议时间长一些。还有一个方法是克隆你的片段，抽质粒后再双切，然后回收你要的片段，当然是你做了好多次没有结果的情况下。
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活着就要让人感受到你的存在。
5楼2011-04-16 11:50:16
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龙开聪

金虫 (小有名气)

贵是一种态度
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
请问这两个酶是用什么Buffer？？
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挺住
6楼2011-10-04 10:20:54
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lingxingcao

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+1): 这种事情，楼主应该自己解决。。。 2011-10-04 11:14:32
引用回帖:
6楼: Originally posted by 龙开聪 at 2011-10-04 10:20:54:
请问这两个酶是用什么Buffer？？

TaKaRa的商品目录上可以查到，就在前几页。
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2011-10-04 10:43:02
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
根据多年的经验，总结出来就四个字——大量过夜
EcoR1和Xho1用的应该是10*H buffer
这个的话酶各0.5ul 50ul体系 37摄氏度 8h 能切的很干净
楼主提出的问题不是很专业，酶切的效率和很多因素相关，切质粒和质粒浓度和类型有关。pcr产物则主要涉及到保护碱基的大小和搭配。
赞一下(1人) 回复此楼
可以用QQ找我……
8楼2011-10-04 12:00:41
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