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寒蕤

铜虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】双酶切PCR产物的时间已有7人参与

各位好！PCR产物用双酶切的时候，一般切多长时间比较合适呢？我用的是NEB公司的EcoR1和Xho1的酶。

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1楼 2011-04-14 21:20:30

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lingxingcao

新虫 (小有名气)

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西瓜(金币+1): 这种事情，楼主应该自己解决。。。 2011-10-04 11:14:32

引用回帖:

6楼: Originally posted by 龙开聪 at 2011-10-04 10:20:54:
请问这两个酶是用什么Buffer？？

TaKaRa的商品目录上可以查到，就在前几页。

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7楼2011-10-04 10:43:02

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kuang_jie

铜虫 (初入文坛)

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一般三四个小时就OK了

2楼2011-04-15 09:58:32

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空谷幽风

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最是温度下两个小时足够，请参考http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2311683

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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?

3楼2011-04-16 09:24:21

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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)

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西瓜(金币+2): 欢迎交流 2011-10-04 11:10:48

引用回帖:

Originally posted by 寒蕤 at 2011-04-14 21:20:30:
各位好！PCR产物用双酶切的时候，一般切多长时间比较合适呢？我用的是NEB公司的EcoR1和Xho1的酶。

看他们两在共同Buffer里的酶切效率了，都能达到100%的话旧一起切，3-4小时差不多了，要是不放心的话就过夜吧
如果他们两在共同Buffer里的酶切效率不搞的话，建议分两次单酶切，第一次酶切后回收再用第二个酶切，不过损失较多，要多制备点

赞一下(2人)

4楼2011-04-16 10:45:01

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