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elalei1999铜虫 (小有名气)
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怎么扩不出来 已有1人参与
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本人从植物叶片中提取RNA,跑胶的条带还可以，反转录后，扩Actin看家基因有正确的电泳条带，但是在扩目的基因的时候什么都跑不出来，只有引物的二聚体出现，两个引物的Tm值分别为54和64。曾用50--60的退火温度扩增。 求大家给支招，是退火温度的问题，还是RNA降解，难道是引物设计不对？ 困惑中........求解。谢大伙！！ [ Last edited by amisking on 2010-8-14 at 22:27 ] |
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ljwei_163
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建议：1，引物多设计几对，尽量退火温度不要差太多 2.跑梯度，这事做反转录必须的！ 3.Actin能扩出来，基本不能说明问题。因为肌动蛋白本身是个基因家族，总RNA降解一点和不降解对其影响不大 4.你确定你的基因在你取材的时间和空间（即部位）是表达的么？这点也很重要 5.个人感觉你引物的问题比较大，多跑几对吧，有目的条带后，如引物二聚体仍严重，需要提高Mg浓度，当然，这是后话，引物设计建议你结合primer5和ｏｌｉｇｏｄＴ６。０仪器使用，各有千秋 希望对你有所帮助 |
4楼2009-11-27 11:37:17
shenye.judy
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