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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】5'端扩不出来,求高手指点! 急~
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我是果果

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】5'端扩不出来,求高手指点! 急~ 已有1人参与

我做了两次5'RACE了,第一次可能是模板有问题,RNA放的时间长了,我前天又提了一次,可以扩出核心片段,但条带很淡,但可以证明模板没问题吧,昨天就接着做了5'RACE,但outer还是没有条带,我的outer目标片段是677bp,用的是TaKaRa的试剂盒,实在不知道怎么回事了,求各位高手指点,谢谢了!
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1楼 2010-09-18 16:41:15
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sfxt001

木虫 (小有名气)
你做完outer之后做了inner么？
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2楼2010-09-18 21:44:29
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我是果果

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by sfxt001 at 2010-09-18 21:44:29:
你做完outer之后做了inner么？

没有,outer没有条带我就没有往下做了,继续做下去可能会有结果吗?
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3楼2010-09-18 22:00:44
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sfxt001

木虫 (小有名气)
我是果果(金币+2):谢谢提醒 2010-09-19 15:53:58
引用回帖:
Originally posted by 我是果果 at 2010-09-18 22:00:44:


没有,outer没有条带我就没有往下做了,继续做下去可能会有结果吗?

当然有可能有结果，设计inner的主要目的就是这个。
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4楼2010-09-18 22:04:53
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jasco

木虫 (正式写手)
我是果果(金币+2):谢谢指点 2010-09-19 15:54:23
outer第一轮pcr很少有条带的，赶紧做inner吧，最好做个梯度优化下pcr条件
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5楼2010-09-19 09:01:08
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我是果果

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by jasco at 2010-09-19 09:01:08:
outer第一轮pcr很少有条带的，赶紧做inner吧，最好做个梯度优化下pcr条件

我做了inner.可还是没有条带,我都怀疑outer产物或前面的cDNA是不是有问题,这个试剂盒可靠吗?还有其他能解决的方案吗?谢谢指点!
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6楼2010-09-19 19:11:48
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小白3521

金虫 (小有名气)
我是果果(金币+1): 2010-09-20 10:07:00
我用的takara的，5‘反正是做出来了，outer是基本上没条带的
5’RACE对RNA要求比较高，如果RNA的5'端降解的比较厉害的话 可能P不出来
再就是可以尝试下换换引物
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7楼2010-09-19 21:34:52
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我是果果

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 小白3521 at 2010-09-19 21:34:52:
我用的takara的，5‘反正是做出来了，outer是基本上没条带的
5’RACE对RNA要求比较高，如果RNA的5'端降解的比较厉害的话 可能P不出来
再就是可以尝试下换换引物

引物应该是没什么问题的,RNA也是才提的,应该不会这么快降解吧?
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8楼2010-09-20 10:06:52
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小白3521

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 我是果果 at 2010-09-20 10:06:52:


引物应该是没什么问题的,RNA也是才提的,应该不会这么快降解吧?

引物的问题不好说，我有个基因换了引物才P出来的
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9楼2010-09-21 09:28:38
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