| 查看: 2147 | 回复: 7 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
elalei1999铜虫 (小有名气)
|
[交流]
怎么扩不出来 已有1人参与
|
||
|
本人从植物叶片中提取RNA,跑胶的条带还可以，反转录后，扩Actin看家基因有正确的电泳条带，但是在扩目的基因的时候什么都跑不出来，只有引物的二聚体出现，两个引物的Tm值分别为54和64。曾用50--60的退火温度扩增。 求大家给支招，是退火温度的问题，还是RNA降解，难道是引物设计不对？ 困惑中........求解。谢大伙！！ [ Last edited by amisking on 2010-8-14 at 22:27 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有97人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
-
从"水不溶"到 71 mg/mL：雷特格韦的 pH 依赖溶解与螯合色谱边界
已经有0人回复
-
133 Ų 的极性表面积，如何决定 TNG462 的母液配制与色谱条件
已经有0人回复
-
两个氟原子与一段氨基甲酸甲酯：BLU-5937 的母液配制与稳定性边界
已经有0人回复
-
司美那非（TPN171）：从嘧啶酮母核到工艺放大的结构、色谱与质控参数解析
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR一直扩不出目的条带
已经有10人回复
- PCR扩不出目的基因
已经有14人回复
- ORF老是扩不出来
已经有8人回复
- [求助]高保真酶扩不出来
已经有15人回复
- 5‘Race扩不出带，求高手指点
已经有12人回复
- 【求助/交流】做DGGE，直接用带夹引物扩增不出来，怎么办？
已经有10人回复
- 【求助/交流】5'端扩不出来,求高手指点! 急~
已经有8人回复
- 【求助/交流】5'Race反复做不出来，该怎么办
已经有74人回复
- 【求助/交流】PCR扩增核心片段，再也扩不出来了，怎么办
已经有16人回复
- 【交流】扩散不出来啊！
已经有12人回复
阳光金鱼唐
金虫 (著名写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1177.2
- 散金: 1048
- 红花: 6
- 帖子: 1022
- 在线: 179.8小时
- 虫号: 959172
- 注册: 2010-03-01
- 性别: MM
- 专业: 计算机软件
8楼2010-08-14 20:53:09
ljwei_163
金虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1798.7
- 散金: 10
- 红花: 1
- 帖子: 816
- 在线: 100.8小时
- 虫号: 574599
- 注册: 2008-06-16
- 性别: GG
- 专业: 植物学研究的新技术、新方
2楼2009-11-27 11:17:19
3楼2009-11-27 11:25:16
liyong1981 
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 774.1
- 散金: 116
- 帖子: 905
- 在线: 35.2小时
- 虫号: 357405
- 注册: 2007-04-27
- 性别: GG
- 专业: antibody
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+4,VIP+0):谢谢交流 11-27 16:33
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+4,VIP+0):谢谢交流 11-27 16:33
|
建议：1，引物多设计几对，尽量退火温度不要差太多 2.跑梯度，这事做反转录必须的！ 3.Actin能扩出来，基本不能说明问题。因为肌动蛋白本身是个基因家族，总RNA降解一点和不降解对其影响不大 4.你确定你的基因在你取材的时间和空间（即部位）是表达的么？这点也很重要 5.个人感觉你引物的问题比较大，多跑几对吧，有目的条带后，如引物二聚体仍严重，需要提高Mg浓度，当然，这是后话，引物设计建议你结合primer5和ｏｌｉｇｏｄＴ６。０仪器使用，各有千秋 希望对你有所帮助 |
4楼2009-11-27 11:37:17
